TLR2、TLR4及相关细胞因子与军团菌感染关系的研究

发布时间：2020-09-15 20:47

　　目的 ①了解肺部感染病人军团菌的感染状况； ②了解军团菌感染组、病人对照组和健康人对照组TLR2和TLR4mRNA在外周血PBMC中的表达情况； ③探讨相关细胞因子在军团菌感染中的作用及其与TLR2、TLR4的关系。方法 ①收集277例肺部感染患者尿液标本，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定尿液中的的Lp1特异性尿抗原；采用PCR法扩增尿液中军团菌属特异性16SrRNA基因。 ②军团菌感染的判定标准为Lp1特异性尿抗原阳性或尿液中军团菌属特异性基因扩增阳性。 ③将17例军团菌感染者作为病例组，随机抽取20例军团菌检测阴性的肺部感染者为病人对照组，同期收集20例健康体检者为健康人对照组，采用real-time RT-PCR方法检测军团菌感染组、病人对照组和健康人对照组TLR2和TLR4mRNA，分析PBMC TLR2和TLR4mRNA与军团菌感染的关系； ④将17例军团菌感染者作为病例组，随机抽取20例军团菌检测阴性的肺部感染者为病人对照组，同期收集20例健康体检者为健康人对照组，ELISA方法分别检测军团菌感染组、病人对照组和健康人对照组血清中IL-1、2、6、TNF-α的浓度，分析军团菌感染与相关细胞因子的关系及TLR2、4的表达与细胞因子水平的关系。 ⑤采用SPSS13.0软件进行资料的录入和分析。结果 ①277例患者中，由于部分患者少尿。对243例尿标本进行了军团菌16SrRNA基因PCR扩增阳性的为10人，阳性率为6.58%。对213例LP1尿抗原检测,共有10例检测结果阳性，LP1尿抗原阳性率为4.0%(10/213)。2个检测方法同时阳性的结果有3例。军团菌总阳性率为6.13%。不同基础病种军团菌感染率不同，以血液病组最高（30.00%），神经系统疾病组次之（17.64%），慢性阻塞性肺病组最低（11.71%）。 ②比较病例组与病人对照组、病例组与健康人对照组的PBMC中TLR2mRNA和TLR4mRNA相对表达量，real-time RT-PCR检测结果显示军团菌感染组比健康人对照组的TLR2Ct/β-actinCt比值显著减少，即军团菌感染组TLR2 mRNA的相对表达量高于正常健康人组，差别有统计学意义，p㩳0.0001。TLR2 mRNA表达未在军团菌感染组与病人对照组显示有差异,p=0.983。军团菌感染组比健康人对照组的TLR4Ct/β-actinCt比值显著减少，即军团菌感染组TLR4 mRNA的相对表达量高于健康人对照组，差别有统计学意义，p㩳0.0001。TLR4 mRNA表达未在军团菌感染组与病人对照组显示有差异,p =0.224。 ③军团菌感染组IL-2的浓度（41.072±7.153pg/ml）比健康人对照组（4.263±1.132pg/ml）高；IL-6浓度（216.663±24.346pg/ml）比健康人对照组（125.325±11.936pg/ml）高；TNF-α浓度（389.348±77.832pg/ml）比健康人对照组（39.137±7.389pg/ml）高，差别均有统计学意义（P0.05）。但IL-1的浓度在军团菌感染组与健康人对照组间未见到差异。以IL-2代表Th1型细胞因子，IL-6代表Th2型细胞因子计算Th1/Th2比值，Th1/Th2比值军团菌感染组（0.3834±0.11）与健康人对照组（0.246±0.0981）比较，差别无统计学意义。以TLR2/β-actin Ct值与IL-1、2、6以TNF-α及的浓度作相关分析，结果显示TLR2/β-actin Ct与IL-2、6及TNF-α的分泌呈负相关关系相关系数分别为-0.783、-0.816、-0.664（p0.05），随着TLR2 mRNA的增加，相应细胞因子分泌增加。以TLR4/β-actin Ct值与IL-1、2、6以TNF-α及的浓度作相关分析，结果显示TLR4/β-actin Ct值与IL-1、2、6及TNF-α的分泌呈负相关关系相关系数分别为-0.691、-0.713、-0.768、-0.889（p0.05），随着TLR4mRNA的增加，相应细胞因子分泌增加。结论 ①太原地区肺部感染患者中，军团菌感染者占6.13%。 ②PBMC中TLR2及TLR4mRNA的表达量在军团菌感染组与其他肺炎感染者组无差异，但均高于健康人对照组，差异有统计学意义，提示TLR2和TLR4在军团菌病感染中有一定作用。 ③TLR2、4与Th1及Th2细胞因子分泌有正相关关系，提示其在机体抗军团菌感染状态中的生物学作用可能是通过细胞因子的分泌来实现的。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R563.1
【部分图文】：

扩增曲线,医科,山西,病人

山西医科大学硕表 2- 2 T L R4 m RN A 在军团菌感染组和正常人对照组 PB M C 表达的差异分组例数 TL R4 C t /β - ac t i nC t 值（ x ±军团菌感染组 17 1. 2 18 0 ±0 . 03 9 9 5 病人对照组 20 1 .1 98 4 ±0 . 06 0 9 3 健康人对照组 20 1. 2 77 9 ±0 . 03 9 9 2 1 4 . 55 5 , P 㩳0 . 0 00 1

溶解曲线

=1 4 . 55 5 , P 㩳0 . 0 00 1图 1 R e al - t im e R T- PC R T LR 2 m RN A 扩增曲线

扩增曲线,曲线

图 3 R e a l- t im e R T- P CR T LR 4 m RN A 扩增曲线图 4 R e a l- t im e R T- P CR T LR 4 m RN A 溶解曲线 3 讨论

【参考文献】