白细胞介素-1在人肥大细胞参与人支气管上皮间充质转化中的作用

发布时间：2020-09-21 14:27

　　目的:探究白细胞介素-1(IL-1)在人外周血祖细胞源性肥大细胞参与支气管上皮细胞间充质转化(EMT)中的作用。方法:从人外周血分离纯化祖细胞(肥大细胞前体细胞),在体外诱导分化发育为成熟肥大细胞,将人支气管上皮细胞株(16HBE细胞株)分别与IL-1、肥大细胞或者共同加入IL-1及成熟肥大细胞培养3天后,倒置显微镜下观察细胞形态变化;用免疫细胞化学法及Western Blot法检测16HBE细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达;细胞划痕试验检测肥大细胞与IL-1对16HBE迁移及侵袭能力的影响;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测不同时间段细胞上清中TGF-β1的释放量;CCK-8实验检测16HBE细胞的增殖能力。加入TGF-β1中和抗体后,用Western Blot法检测16HBE细胞中E-钙黏蛋白(E-Cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:1.免疫细胞化学及May-Grunwald Giemsa染色法鉴定所培养的细胞为肥大细胞。2.免疫细胞化学法结果显示:IL-1或肥大细胞可分别降低16HBE细胞E-Cadherin的表达,增强Vimentin的表达。3.Western Blot法结果显示:IL-1或肥大细胞可分别减少16HBE细胞E-Cadherin的表达,增加Vimentin的表达。加入IL-1后,肥大细胞减少16HBE细胞E-Cadherin表达量及增加Vimentin表达量的能力得到增强。4.细胞划痕试验结果显示:IL-1或肥大细胞可分别增强16HBE的迁移能力,加入IL-1后,肥大细胞促进16HBE迁移的能力增强。5.ELISA结果显示:IL-1或肥大细胞可分别刺激16HBE释放TGF-β1,且随着刺激时间延长,16HBE释放TGF-β1增加,IL-1对肥大细胞刺激16HBE释放TGF-β1的能力有增强作用。IL-1可以刺激肥大细胞释放TGF-β1,且随着刺激时间延长,肥大细胞释放TGF-β1增加。6.CCK-8结果显示:IL-1或肥大细胞可分别促进16HBE的增殖,加入IL-1后,肥大细胞促进16HBE增殖的能力增强。7.加入TGF-β1中和抗体后,Western Blot结果显示由IL-1或肥大细胞分别诱导16HBE细胞E-Cadherin蛋白表达减少,Vimentin蛋白表达量增加的作用受到抑制。结论:IL-1或人外周血源性肥大细胞可以分别增强16HBE细胞Vimentin蛋白的表达,降低E-Cadherin蛋白表达,并能促进上皮的增殖和迁移,刺激16HBE释放TGF-β1。结果提示:IL-1及肥大细胞均有可能参与人支气管上皮细胞发生上皮间充质转化(EMT),这可能与TGF-β1有关,且IL-1可能会增强肥大细胞促进人支气管上皮细胞发生上皮间充质转化(EMT)的能力。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R56
【部分图文】：

免疫细胞化学,格林,肥大细胞,胃促胰酶

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相差显微镜,细胞形态,放大倍数,发生形态学

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培养环境,细胞,放大倍数,共培养

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【参考文献】