ADAM33基因多态性与新疆维吾尔族、汉族哮喘的关系

发布时间：2020-09-26 18:53

　　目的:分析新疆地区维吾尔族、汉族人群中ADAM33基因F+1、T1位点多态性及其连锁不平衡关系,探讨其构成的单体型与支气管哮喘(简称哮喘)易感性之间的关系。方法:对69例维吾尔族、63例汉族哮喘患者和64名维族、70名汉族健康对照者采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定ADAM33基因T1、F+1位点多态性。设立统一的调查表,对所有研究对象进行哮喘危险因素调查、血清变应原T-IgE检测,嗜酸粒细胞测定,肺功能测定。结果:1.维、汉哮喘组的哮喘患者血清T-IgE水平、EOS明显高于本民族对照组(P0.01)。2.新疆维吾尔族、汉族ADAM33基因F+1位点的基因型分布及等位基因分布频率在病例组与对照组间无差异。3 T1位多态性哮喘组基因型分布及等位基因分布频率与对照组有统计学差异,C等位基因明显高于正常人组。4.ADAM33基因T1位点基因多态性与哮喘的关系,相对TT基因型而言,TC杂合型与TC+CC基因型,均能显著增加哮喘发生的危险性(P0.05)。5. F+1位点、T1位点SNP与血浆IgE水平无关联性6 Tl位点SNP三种基因型间第一秒用力呼气量(FEV1)实测值/预测值%水平有差异,TT基因型与TC、CC基因型比较差异有显著性意义(P0.05);而TC基因型与TT基因型、CC基因型比较无显著性意义(P0.05)。7连锁不平衡分析及单体型构建结果:F+1位点、T1位点SNP存在较弱连锁不平衡(D′=0. 256)。构建了4种单体型,存在单体型频率分布在病例组和对照组间差异有统计学意义。两位点所构成4种单体型频率分布在两民族病例组和正常对照组的差异均无统计学意义。结论:F+1位点的SNP与支气管哮喘的发生无相关性。T1位点的SNP多态性与支气管哮喘的发生有相关性, T等位基因可能是哮喘病的保护基因,C等位基因可能是哮喘病的易患基因。ADAM33基因F+1位点、T1位点存在较弱的连锁不平衡关系,A-C;G-C与哮喘易感性相关性。基因单体型频率在新疆两民族人群中的分布差异无统计学意义。
【学位单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R562.25
【部分图文】：

示意图,研究热点,基因结构,位点

图 1 ADAM33 基因结构及研究热点 SNPs 位点示意图资料和方法1．研究对象与诊断标准病例组来自2007年8月至2008年7月在新疆医科大学第一附属医院呼吸科经临床检查（病史、生化、肺功能等）确诊，相互无血缘关系的未与其他民族通婚者并且近期未用糖皮质激素的132名支气管哮喘病人。其中维族69名：男31名，女38名，平均年龄19~69（39.77±11.79）；汉族63名：男27名，女36名，平均年龄18~69（41.14±13.37）。对照组为在该医院体检的健康人共134名，其中维族64名：男30名，女34名，平均年龄20~69（39.63±11.28）；汉族70名：男34名，女36名，平均年龄19~67（45.09±13.36）。近期无感染史、无个人及家族过敏性疾病史，亲属中无哮喘患者，排除肺、肝、肾等疾病。

样本,琼脂糖凝胶,循环程序,总反应

为 OD260×稀释倍数（250）×50ug/ml。实际浓度，用 TE 将基因组 DNA 进一步稀释成 100ng/μl 的 1%的含 EB 的琼脂糖凝胶，采用 1×TBE 缓冲液，加入 4ul /cm，入胶后 8V/cm 的电压进行电泳，1h 后，紫外灯下观亮度及纯度。组 DNA 检测 DNA 提取液 lul，PRC 扩增 β-Actin，有扩增产物者 DNA 。 β-Actin 扩增引物为： 5’-GCCCTCTGCTAACTAAAAAGAAAATCGCCAATC-3’ 。将引物用灭菌 dd 工作液。 PCR 反应体系为 :10×PCR Buffer2μL ， MP1μL，上下游引物各 0.5μL，10U/μl TaqDNA 聚合酶 0.1UL.总反应体系为 20μL 循环程序: 预变性 94℃ 4min，反应循8℃ 30s、延伸 72 ℃ 60s，循环 30 次；最后 72℃延伸 8min，μL 在 l%的琼脂糖凝胶上电泳检测，PCR 产物大小为 350b

位点,琼脂糖凝胶电泳,凝胶,溴酚兰

凝胶厚度在 3-5mm 之间，琼脂糖凝胶浓度为 2%。放置 30 分钟，凝胶完全凝固后，小心移去梳子。没过胶面约 lmm 的 1×TBE 电泳缓冲液。PCR 产物 10μl 与 6×溴酚兰加样缓冲液 2μl 混合后上样至点样孔中子量 DL2000Marker 对照，以确定反应条带。电泳槽，100V 进胶，80V 电泳 30 分钟。凝胶成像仪成像，鉴定 PCR 产物。F+1 位点的扩增产物为 154bp;为 999bp（见图 3-4）。

【共引文献】