HA及其受体CD44在慢性哮喘模型大鼠气道重构中作用的实验研究

发布时间：2020-10-02 10:56

　　目的 1.研究慢性支气管哮喘状态下,大鼠肺组织中透明质酸(hyaluronan ,HA)的表达,大鼠支气管肺泡灌洗液中(brochoalveolar lavage fluid ,BALF)HA的含量,大鼠气道中CD44蛋白的表达。 2.研究慢性支气管哮喘状态下,大鼠气道中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2和P-ERK1/2的蛋白表达及活化情况。 3.研究慢性支气管哮喘状态下,HA含量、CD44蛋白表达与支气管壁厚度(WA/Pi)、支气管壁平滑肌厚度(S/Pi)、支气管壁平滑肌细胞核数量(N/Pi)及ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达的相关性。 4.探讨HA及其受体CD44与气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells ,ASMCs)异常增殖的可能关系。材料与方法建立慢性哮喘大鼠模型,观察气道重构的组织学变化,应用免疫组织化学检测气道中HA,CD44表达变化,ELISA法检测肺组织和BALF中HA的含量,荧光标记聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis of fluorophore- labeled saccharides , PAGEFS)检测肺组织中HA的含量,Western-blot检测气道中CD44,ERK1/2及P-ERK1/2蛋白的表达。结果. 1.慢性哮喘组大鼠气道出现明显的病理变化:气道壁及气道平滑肌明显增厚、细胞外基质沉积、上皮下纤维化、新生血管的形成、黏膜下及管壁可见大量嗜酸性粒细胞及其他炎症细胞浸润。慢性哮喘组支气管壁厚度( WA/Pi )(13.23±1.30)显著高于对照组(9.43±1.42)(n=10,P0.01);支气管壁平滑肌厚度(S/Pi) (4.47±0.77)显著高于对照组(3.55±0.70)(n=10,P0.05);支气管壁平滑肌细胞核数( N/Pi )( 0.0435±0.0121 )显著高于对照组(0.0303±0.0070)(n=10,P 0.01)。 2.慢性哮喘大鼠气道上皮下及平滑肌肌束周围HA沉积较正常对照组明显增加。肺组织HA含量(9.16±0.78)明显高于对照组(7.05±0.70)(n=10,P 0.01); BLAF中HA含量(7.64±1.05)亦明显高于对照组( 6.63±0.96()n=10,P0.05)。 3.慢性哮喘大鼠气道CD44的表达(14.39±1.26)明显高于对照组(9.50±1.20)(n=10,P 0.01)。 4.慢性哮喘大鼠气道中ERK1/2蛋白表达(2.38±0.28)明显高于对照组(2.03±0.34)(n=10,P 0.05);慢性哮喘大鼠气道中P-ERK1/2蛋白表达(0.62±0.12)明显高于对照组(0.46±0.10)(n=10,P0.01);慢性哮喘大鼠气道中P-ERK1/2与ERK1/2的比值(0.26±0.03)明显高于对照组(0.23±0.03)(n=10,P0.05)。5.肺组织HA含量与支气管壁厚度(WA/Pi)、支气管壁平滑肌厚度(S/ Pi)、支气管壁平滑肌细胞核数量(N/ Pi)呈显著正相关(r值分别为0.770、0.700、0.870,对应p值分别为p0.01、p0.05、p0.01);CD44蛋白表达与支气管壁厚度(WA/Pi)、支气管壁平滑肌厚度(S/ Pi)、支气管壁平滑肌细胞核数量(N/ Pi)呈显著正相关(r值分别为0.692、0.673、0.817,对应p值分别为p 0.05、p0.05、p0.01);肺组织HA含量与ERK1/2和P-ERK1/2蛋白表达呈显著正相关(r值分别为0.754、0.824,p值分别为p0.05、p0.01);CD44蛋白表达与ERK1/2和P-ERK1/2蛋白表达呈显著正相关(r值分别为0.752、0.809,p值分别为p0.05、p0.01 )。结论慢性哮喘气道中细胞外基质成分(extracellular matrix ,ECM)HA及其受体CD44的表达较正常组明显增高,ERK1/2、P-ERK1/2表达及活性亦显著上调,HA与其受体CD44与气道重构相关指标、ERK1/2和P-ERK1/2蛋白表达均密切相关。提示哮喘状态下,HA与其受体CD44可能通过ERK1/2信号通道促进哮喘ASMCs的异常增殖而参与慢性哮喘气道重构过程。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R562.25
【部分图文】：

气道,大鼠,对照组

图 1：正常组支气管平滑肌（×100）；图 2：慢性哮喘组支气管平滑肌（×100）Fig 1：The bronchial smooth muscle in control group ( ×100）, Fig 2：The bronchial smooth muscle in chronicasthmatic group（×100）.图 3：正常大鼠气道少量 HA 表达（×100）；图 4：慢性哮喘大鼠气道 HA 表达较对照组明显增加

气道,大鼠,对照组

25图 3：正常大鼠气道少量 HA 表达（×100）；图 4：慢性哮喘大鼠气道 HA 表达较对照组明显增加（×100）Fig 3：There were little expression of HA in airways of control rats ( ×100）, , Fig 4：There were significantly higherexpression of HA in airways of chronic asthmatic rats than control rats ( ×100）,

【参考文献】