第一部分不同激发方法制作大鼠哮喘模型的比较 目的:探讨制作大鼠哮喘模型新的激发方法。 方法:取4周龄雄性SD大鼠30只,随机取其中10只设为对照(Control)组,在致敏阶段以等量生理盐水替代10%卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)混合液腹腔注射,激发阶段以生理盐水替代2%OVA超声雾化吸入。其余20只于第1天腹腔注射含氢氧化铝、灭活百日咳杆菌的10%OVA 1ml致敏,2周后随机分为两组,各10只,分别泵雾化(Pump)和超声雾化(Ultrasonic)吸入2%OVA激发,复制动物哮喘模型;比较两种激发方式优缺点。 结果: 1.哮喘模型的建立:与Control组相比,Pump组及Ultrasonic组大鼠在经过致敏和激发阶段后出现了明显的呼吸窘迫症状:烦躁不安、呼吸急促、腹肌抽搐、青紫等表现;肺组织病理学显示气道周围明显炎症改变;肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)和中性粒细胞百分比的改变提示大鼠哮喘模型复制成功。 2.通过两种雾化激发方式制作哮喘的模型,均出现了典型的哮喘样症状,但Pump组首次开始出现哮喘样症状的天数明显早于Ultrasonic组(P＜0.01);在激发天数相同时,Pump组发生哮喘样症状的大鼠数明显多于Ultrasonic组(P＜0.05)。但两组在肺组织病理学及BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)和中性粒细胞百分比无明显差异。 结论: 1.采用卵蛋白(OVA)与免疫佐剂氢氧化铝、灭活百日咳杆菌致敏、OVA泵雾化和超声雾化激发均能够成功复制大鼠哮喘模型。 2.泵雾化激发方式优于传统的超声雾化激发方式。 第二部分布地奈德混悬液对大鼠哮喘模型气道炎症的保护作用 目的:探讨吸入性糖皮质激素布地奈德混悬液(Budesonide,BUD)对大鼠哮喘模型气道炎症的保护作用。 方法:取4周龄雄性SD大鼠40只,随机设为对照组(Control)、哮喘模型(Model)组、布地奈德(BUD)组和地塞米松(DexamethasoneDXM)组四组,每组各10只。Control组使用泵雾化激发,余制作同第一部分。Model组制作同第一部分Pump组;BUD组和DXM组除在每次激发前分别用BUD混悬液吸入,DXM腹腔注射等干预处理,余致敏及激发步骤同Model组。末次激发24小时后麻醉处死大鼠,取激发后各组大鼠BALF液及肺组织分别测定BALF液细胞总数和各组细胞所占百分比,结合肺组织病理学检测分析气道炎症状况。 结果: 1.BUD、DXM组激发后仍出现哮喘症状,但较Model组明显减轻。两组支气管周围炎性细胞浸润评分及支气管管壁周围EOS数较Control组显著增高(P均＜0.01),但较Model组显著降低,分别为P均＜0.05和P均＜0.01,而两组间支气管周围炎性细胞浸润评分及支气管管壁周围EOS数无明显差异(P均＞0.05)。 2.相对于Control组,Model组、BUD组、DXM组三组的BALF中细胞总数显著增高(P均＜0.01);EOS、中性粒细胞百分比显著增高,巨噬细胞显著降低(P均＜0.01)。与Model组相比,BUD组和DXM组EOS、中性粒细胞百分比显著降低,巨噬细胞明显增高(P＜0.05);差异有显著性;BUD组和DXM组两组间无显著差异(P＞0.05)。 结论: 布地奈德混悬液泵雾化能显著改善大鼠哮喘模型气道炎症且与全身使用地塞米松有相似的作用。 第三部分布地奈德混悬液对哮喘大鼠模型肺组织血红素氧合酶-1的调控机制 目的:研究大鼠哮喘模型肺组织血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)蛋白及基因表达特点,以及BUD对HO-1蛋白及基因表达的影响,为阐明BUD治疗哮喘的作用机制提供实验室数据。 方法:取4周龄雄性SD大鼠50只,随机设为对照Control组、Model组、血晶素(Hemin)组、BUD组和DXM组5组,每组各10只;Control组、Model组制作同前第二部分;Hemin组、BUD组和DXM组除在每次激发前分别用Hemin、BUD、DXM等干预处理外,其余处理同Model组。末次激发24小时后麻醉处死大鼠,取激发后各组动物动脉血,BALF及肺组织,分别测定碳氧血红蛋白(COHb)含量和BALF细胞总数和各组细胞分类百分比,用免疫组织化学法测定肺组织HO-1的蛋白表达变化、RT-PCR法测定HO-1基因表达的变化;结合肺组织病理学检测分析气道炎症状况。 结果: 1.BUD、DXM、Hemin组激发后亦出现哮喘样症状,但较Model组明显缓解。相对于Control组,Model组、Hemin组、BUD组及DXM组支气管周围炎性细胞浸润评分显著增高(P均＜0.01);而相对于Model组,Hemin组支气管周围炎性细胞浸润评分显著减低(P＜0.05)、BUD组及DXM组支气管周围炎性细胞浸润评分亦显著减低(P均＜0.01),三组之间无显著差异(P均＞0.05);相对于Control组,Model组、Hemin组、BUD及DXM组支气管管壁周围EOS显著增高(P均＜0.01);而相对于Model组、Hemin组、BUD组及DXM组支气管管壁周围EOS显著减低(P均＜0.01),三组之间无显著差异(P均＞0.05)。 2.与Control组相比,Model组、Hemin组、BUD组和DXM组BALF中细胞总数显著增高(P＜0.01);与Model组相比,Hemin组、BUD组和DXM组细胞总数显著下降(P＜0.01),三组间无显著差异(P均＞0.05);与Control组相比,Model组、Hemin组、BUD组和DXM组EOS、中性粒细胞百分比显著增高,巨噬细胞百分比显著降低,(P均＜0.01)差异有显著性;与Model组相比,Hemin组、BUD组和DXM组EOS、中性粒细胞百分比显著减低;巨噬细胞百分比显著增高,(P＜0.05)差异有显著性,而Hemin、BUD和DXM组三组间无显著差异(P均＞0.05)。 3.免疫组织化学显示:与Control相比,Model组、Hemin组、BUD组及DXM组HO-1蛋白表达显著增强(P＜0.01);与Model组相比,Hemin组、BUD组及DXM组HO-1表达亦显著增强(P均＜0.01),而三组间HO-1表达相比无显著性差异(P均＞0.05)。高倍镜下见HO-1阳性细胞主要定位于支气管上皮细胞、粘膜下巨噬细胞,气道平滑肌细胞偶有表达。 4.RT-PCR结果分析:与Control组相比,Hemin组、BUD组和DXM组检测结果显示HO-1mRNA表达显著增高,(P均＜0.01);而Model组明显增高(P＜0.05);与Model组相比,Hemin组、BUD组和DXM组明显增高(P均＜0.05)。 5.相对于Control组,Model组、BUD组、DXM组和Hemin组的COHb含量均显著增高(P均＜0.01)。而相对于Model组,BUD组COHb含量无显著差异(P＞0.05);但DXM和Hemin组COHb含量均显著增高(P均＜0.05),而后两组组之间无明显差异(P均＞0.05)。 结论: 1.HO-1对大鼠哮喘模型气道炎症有保护作用。 2.布地奈德混悬液及DXM均可上调大鼠哮喘模型HO-1蛋白,基因的表达,增强其活性。 3.布地奈德混悬液及DXM对气道炎症的保护可能与其上调HO-1表达有关。
【学位单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2007
【中图分类】：R562.25
【部分图文】：
层及粘膜外层、肺泡壁和小血管周围等处浸润，肺间质及肺泡腔内可见EOS，支气管内可见粘液栓，气道上皮有损伤、断裂，基底膜稍增厚且形态不规则，平滑肌有轻度的增生。(见图1一2)。2.3.2各组肺组织病理学的比较:
(l)支气管周围炎性细胞浸润评分:与Control组相比较，Pump组及ultrasonic组支气管周围炎性细胞浸润评分显著增高(尸均<0.01);Pump组与ultrasonic组支气管周围炎性细胞浸润评分无显著差异(P>0.05)(见表1一2，图1一D)。(2)支气管管壁周围EOS变化:与Control组比较，Pump组及Ultrasonic组支气管管壁周围Eos显著增高(尸均<0.01);pump组与ultrasoni。组支气管管壁周围EOS无显著差异(P>0.05)(见表l一2，图l一E)。表1一2各组肺组织病理学检查比较组别ControPumPN支气管周围炎性细胞浸润评分(分)支气管管壁周围E0s(个/~2) 100.10士 0.067.01士2.42 2.86士0.34**1011.02士119.13**Ultrasonie 2.77士0.21**注:**与Cofitrol组相比 P<0.011006.73士71.25**3…2’5…2…‘’5…‘…O’5…0一率州则侧记双令画国冷襄耸篇ControlPllmPultrasonie图1一D:各组肺组织支气管周围炎性细胞比较注:**与Control组相比P<0.01。
(l)BALF细胞细胞总数分析:与Control组相比，pu哪组、Ultrasonie组BALF细胞细胞总数显著增高(尸均<0.01);但Pump组和Ultrasonic两组间无显著差异(P>0.05)(见表l一3，图1一3、l一F)。(2)各细胞分类百分比较:与Control组相比，pu呷组Ultrasonie组各细胞分类百分比中EOS，淋巴细胞、显著增高，尤以EOS为主(尸均<0.01);巨噬细胞显著降低(p均<0.01);但pump组和Ultrasonie两组间无显著差异(P>o.os)(见表l一3，图l一4、l一G)。表1一3两组哮喘模型与正常对照大鼠BALF白细胞总数(义 104/ml)组别细胞总数(x一04/m一)嗜酸粒细胞数%淋巴细胞%巨噬细胞%中性粒细胞%其它%Contf01U!trasoniePumPl0l017.1土1.30 117.1士8一5**121.3士10.4** 4.3以).6424.9场.1**26.2土8.34** 8.3士0.04 3.7功.422士习.049妊 2.0110.肚1.1284.7士2.31 51.6士5.31**50.4士2.25**12一4士 1.35**2.5均.02 11.2士1.01** 2.4士0.05注:**与eontrol组相比P<0.ol
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