VIP对LPS应激肺内IL-17及其受体表达的影响与机制

发布时间：2020-10-12 03:18

　　 血管活性肠肽(VIP)是肺内非胆碱能非肾上腺能神经的主要递质之一,对多种免疫细胞的增殖、分化和生物学功能等具有调节作用。VIP可抑制肺泡巨噬细胞吞噬和T细胞增殖、减少肺炎性介质释放、促进气道上皮的损伤修复、清除氧自由基及抗细胞凋亡。白细胞介素17(IL-17)是CD4+T细胞亚群Thl7细胞来源的促炎症细胞因子,具有强大的募集粒细胞、促进多种炎性细胞因子释放及炎症放大效应。IL-17包括6个亚型,IL-17A～F,IL-17家族中最早被发现和最重要的是IL-17A。IL-17主要通过与受体(IL-17R)结合发挥生物学效应。IL-17R证实有5个亚型(IL-17RA-IL-17RD和SEF),其中IL-17RA和IL-17RC均可与IL-17A结合。IL-17R广泛表达于B淋巴细胞、T淋巴细胞、骨髓单核细胞、成纤维细胞和上皮细胞等多种细胞。研究显示：在哮喘和肺部感染患者的支气管肺泡灌洗液中工L-17含量显著增加；囊性纤维化患者气道内IL-17大量存在；IL-17R缺乏的过敏性肺炎小鼠肺部炎症和纤维化明显减少。在上述过程中,肺内IL-17主要来源于Th17细胞还是肺内其他细胞?肺泡巨噬细胞作为肺内重要的常驻细胞能否分泌IL-177肺成纤维细胞作为肺纤维化过程中的重要效应细胞,其胞膜上IL-17R的表达有何变化?以及VIP对肺内IL-17和IL-17R表达的调节作用尚未见报道。 目的： 观察VIP对LPS应激肺内IL-17和IL-17R表达的影响,并初步探讨其信号转导途径。 方法： 1.以昆明小鼠为研究对象,腹腔注射LPS建立急性肺损伤(ALI)模型。取肺组织切片,HE染色后进行组织病理学观察；对支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞进行计数和分类；采用ELISA法检测BALF和肺组织匀浆中IL-17的蛋白含量；用RT-PCR法检测小鼠肺组织匀浆中IL-17A mRNA和工L-17RA／C mRNA的表达。 2.VIP对LPS诱导的巨噬细胞工L-17表达和分泌的影响：以巨噬细胞为研究对象,采用ELISA法检测巨噬细胞培养上清液中IL-17含量；采用RT-PCR法检测巨噬细胞IL-17A mRNA的表达,并观察PKC阻断剂H-7、PKA阻断剂H-89对VIP调节作用的影响。 3.VIP对LPS诱导的肺成纤维细胞IL-17R蛋白和工L-17RA／C mRNA表达的影响：以肺成纤维细胞为研究对象,采用流式细胞术检测肺成纤维细胞胞膜上IL-17R蛋白的表达；采用RT-PCR法检测肺成纤维细胞IL-17RA／C mRNA的表达；并观察PKC阻断剂H-7、PKA阻断剂H-89对VIP调节作用的影响。 结果： 1.小鼠肺组织形态学和细胞分子的变化 (1)肺组织病理切片染色显示,ALI组肺间隙增厚,肺泡结构紊乱,渗出明显增加,大量炎症细胞浸润。 (2)白细胞计数结果显示,ALI组小鼠BALF中白细胞数(35.57±3.27×106)显著大于对照组小鼠BALF中的白细胞数(21.48±1.39×106),其中中性粒细胞大量增多(16.71±2.14×106,P0.01)。 (3)ELISA结果显示,ALI组小鼠BALF(142.46±2.41 pg／m1)和肺组织匀浆(577.30±5.98 pg／m1)中IL-17的蛋白含量明显增加(P0.05)。 (4)RT-PCR检测结果显示,ALI组小鼠肺组织匀浆中IL-17A mRNA表达显著增加(0.34±0.02)(P0.01)；IL-17RA mRNA表达无明显变化；IL-17RC mRNA表达显著增多(0.68±0.03)(P0.05)。 2.VIP对LPS诱导的巨噬细胞IL-17表达和分泌的影响： (1)ELISA结果显示,LPS可在各个时间点(4,6,12,24h)上调巨噬细胞IL-17蛋白的分泌,且在6h达到峰值(74.32±3.07)pg／ml；VIP可部分逆转该上调作用,并呈时间(4,6,12,24h)、剂量相关性(10-8mol／L-10-6mol／L)；VIP(10-8mol／L)下调LPS诱导6h巨噬细胞IL-17蛋白分泌的效应可被H-7和H-89部分阻断(P0.05)。 (2)RT-PCR检测结果显示,LPS可在各个时间点(2,4,6,12,24h)上调巨噬细胞IL-17A mRNA的表达,且在6h(1.09±0.09)达到峰值；VIP可部分逆转该上调作用,并呈时间(4,6,12,24h)、剂量相关性(10-8mol／L-10-6mol／L)；VIP(10-8mol／L)下调LPS诱导6h巨噬细胞IL-17A mRNA表达的效应可被H-7和H-89部分阻断(P0.01)。 3.VIP对LPS诱导的肺成纤维细胞IL-17R蛋白和IL-17RA／C mRNA表达的影响： (1)RT-PCR检测结果显示,LPS在各个时间点(2,4,6,12,24h)对肺成纤维细胞工L-17RA mRNA表达无明显影响；LPS刺激肺成纤维细胞6h后,其IL-17RC mRNA表达明显上调(1.51±0.05)(P0.05),VIP可部分逆转该上调作用,VIP下调LPS诱导6h肺成纤维细胞IL-17RC mRNA表达的效应可被H-7和H-89部分阻断(P0.05)。 (2)流式细胞术检测结果显示,LPS刺激肺成纤维细胞6h后,其IL-17R蛋白表达明显增加(0.75±0.10)(P0.05)；VIP预处理可降低该效应；VIP调节LPS诱导的肺成纤维细胞表达IL-17蛋白的效应可被H-7和H-89所阻断(P0.05)。 结论： 1.LPS能促进肺内IL-17、IL-17R蛋白和IL-17RC mRNA的表达。 2.LPS可诱导巨噬细胞表达IL-17,VIP可下调此效应,其胞内信号转导途径与PKC、PKA有关。 3.LPS可上调肺成纤维细胞IL-17R蛋白和IL-17RCmRNA的表达,VIP可下调此效应,其胞内信号转导途径与PKC、PKA有关。
【学位单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R563
【部分图文】：

图1一1.小鼠肺组织病理切片(皿染色，x250)表1一1.小鼠BALF中的白细胞计数和分类(x106，n=5，录s)组别白细胞总数对照组ALI组21.48士1.3935.57士3.27##中性粒细胞3.01士0.3816.71士2.14##巨噬细胞17.70士1.1818.08士1.38

崛邵习禽吉一一卜一 OhZh4h6h12h24h图1一10.vIP对LPS在不同时间点诱导巨噬细胞表达IL一17AmRNA的影响(n=5，了士s)##与oh组相比P<0.01;*与LPS组相比P<0.05，注:Lv:LPS+Vlp，oh，Zh，4h，6h，一Zh

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【引证文献】

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1 赵玉莲;连翘酯苷对鸡法氏囊炎症因子及抗氧化功能的影响[D];东北农业大学;2013年

本文编号：2837559