黄芩素对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响

发布时间：2017-04-03 06:03

  本文关键词：黄芩素对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究黄芩素(Baicalein,BAE)对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响，并初步探讨其作用机制。 方法:体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38，制备TGF-β_1诱导肺成纤维细胞WI-38向肌成纤维细胞分化的细胞模型。采用MTT法检测WI-38细胞的增殖率，WesternBlot法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)、I型胶原蛋(CollagenI,ColI)及相关蛋白表达的变化，光学显微镜观察细胞形态，免疫组化检测细胞内α-SMA蛋白表达。随后在TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞WI-38向肌成纤维细胞分化的细胞模型上，给予不同剂量的BAE干预，用MTT法检测BAE对WI-38细胞的增殖的影响，免疫组化法观察WI-38细胞内α-SMA、Smad2蛋白的表达，透射电镜观察WI-38细胞中细胞器的结构改变，扫描电镜观察WI-38细胞表面结构改变。WestornBlot检测WI-38细胞分化过程中相关蛋白α-SMA、ColI、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白的表达，以ReverseTranscriptionPCR法检测BAE对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞WI-38细胞向肌成纤维细胞分化过程中α-SMA、ColI、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达的影响。 结果：MTT法检测表明：与正常WI-38细胞组相比，5~40μg·L-1TGF-β_1作用WI-38细胞4d后，细胞增殖率上升(P0.05,P0.01)，呈剂量依赖性；光学显微镜下可见：细胞增殖显著，细胞形态改变，从较大的纺锤形或星形结构的成纤维细胞分化为扁平状纤维结构的肌成纤维细胞，分化明显；免疫组化荧光检测显示：正常WI-38细胞组α-SMA蛋白仅在细胞核内表达，模型组α-SMA蛋白在细胞核与胞浆内均表达；WesternBlot结果：TGF-β_1体外诱导4d后，WI-38细胞内α-SMA、ColI蛋白的表达均上调，这一结果与免疫组化结果一致；与TGF/Smads信号通路相关的Smad2、Smad3蛋白表达均上调，并使其磷酸化(P0.01,P0.05)。由此表明在本实验条件下，TGF-β_1体外诱导WI-38成纤维细胞能分化为肌成纤维细胞的细胞模型，该作用可以维持3d。BAE干预下，光学显微镜观察结果：TGF-β_1诱导WI-38细胞分化过程中细胞增殖作用被明显抑制；免疫组化显示：α-SMA蛋白在WI-38细胞包浆内表达减少，Smad2蛋白在WI-38细胞核内表达减少；透射电镜观察表明：WI-38细胞线粒体肿胀减少，髓鞘样变改善；扫描电镜观察显示：WI-38细胞表面微绒毛减少，褶皱较少出现；WesternBlot结果：WI-38细胞中α-SMA、ColI蛋白的表达下调(P0.01,P0.05)，同时与TGF-β/Smads信号通路相关的Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3蛋白的表达下调(P0.01,P0.05)，而Smad7蛋白表达上调(P0.05)；RT-PCR结果：TGF-β_1体外诱导WI-38细胞向肌成纤维细胞分化α-SMA、ColI、Smad2、Smad3mRNA的表达下调(P0.01,P0.05)，Smad7mRNA的表达上调(P0.05)，由此提示BAE可抑制WI-38细胞分化。 结论：BAE对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的在分化过程有一定的抑制作用，，该作用与抑制Smad2/3磷酸化及其细胞核转位，上调Smad7，从而下调α-SMA、抑制细胞内胶原合成并干预TGF-β/Smads信号通路有关。
【关键词】：黄芩素 成纤维细胞 肌成纤维细胞 肺纤维化 α-SMA WI-38 TGF-β_1 胶原蛋白 TGF-β/Smads信号通路
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R563;R96
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-17
• 第一部分 TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化17-32
• 一 材料17-19
• 二 方法19-22
• 三 结果22-31
• 四 小结31-32
• 第二部分 黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化机制的研究32-47
• 一 材料32-33
• 二 方法33-37
• 三 统计学处理37
• 四 结果37-46
• 五 小结46-47
• 讨论47-52
• 结论52-53
• 参考文献53-62
• 综述62-72
• 参考文献69-72
• 附录72-73
• 中英文缩略词表73-74
• 攻读硕士学位期间发表的文章74-75
• 致谢75-76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 林箐;倪莲芳;任雅丽;刘新民;;PPARγ和NF-κB在肺纤维化中的表达与意义[J];北京大学学报(医学版);2009年05期

2 李理;李伟峰;蔡琳;袁伟锋;黄文杰;;吉非替尼对博莱霉素致肺纤维化小鼠α平滑肌肌动蛋白的抑制作用[J];南方医科大学学报;2010年12期

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本文编号：283810