连续性血液净化对急性肺损伤患者血清诱导的肺泡上皮细胞间隙连续通讯功能的影响及其机制

发布时间：2020-10-15 20:53

　　 目的:观察急性肺损伤(acute lung injury,ALI)患者血清诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,ATⅡ细胞)间隙连接蛋白Connexin43(Cx43)及其mRNA表达的变化;研究连续性血液净化(continuous blood purification,CBP)对其表达Cx43及其mRNA的影响和可能机制。 方法:①分别用健康志愿者清晨空腹血清及重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)伴ALI患者行CBP治疗前、治疗6 h、治疗20 h时的血清于体外诱导培养人ATⅡ细胞(A549细胞)48 h,采用免疫荧光法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法检测四组细胞Cx43及其mRNA的表达;②采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测健康志愿者清晨空腹血清及患者CBP治疗不同时间点血清的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,探讨其与该血清诱导的ATⅡ细胞Cx43 mRNA表达的相关性。 结果:①倒置显微镜显示患者CBP治疗前血清诱导的ATⅡ细胞生长缓慢,呈衰老征象;免疫荧光法及RT-PCR显示ALI患者行CBP治疗前的血清诱导的ATⅡ细胞Cx43及其mRNA的表达明显少于健康对照组(P0.01);②倒置显微镜显示随患者行CBP治疗时间的延长,患者血清诱导的ATⅡ细胞生长逐渐加快,形态逐渐恢复至接近健康对照组。免疫荧光法及RT-PCR显示CBP治疗6 h及20 h时患者血清诱导的ATⅡ细胞Cx43及其mRNA的表达明显多于治疗前组(P0.01);CBP治疗20 h时患者血清诱导的ATⅡ细胞Cx43 mRNA的表达明显多于治疗6 h组(P0.01);③ELISA显示CBP治疗前后患者各时间点血清TNF-α水平均高于健康对照组,CBP治疗6 h及20 h时患者血清TNF-α水平明显低于治疗前组(P0.01);CBP治疗20 h时患者血清TNF-α水平明显低于治疗6 h组(P0.01);患者血清TNF-α水平与其诱导的ATⅡ细胞Cx43 mRNA的表达呈直线负相关(r=-0.91,P0.01)。 结论:①ALI患者血清可使ATⅡ细胞Cx43及其mRNA的表达减少;②CBP治疗可增加ALI患者血清诱导的ATⅡ细胞Cx43及其mRNA的表达;③CBP治疗有效清除血清TNF-α可能是其增加ALI患者血清诱导的ATⅡ细胞Cx43及其mRNA表达的重要机制之一。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R563;R459.5
【部分图文】：

附图 1-1 A549 细胞经血清诱导培养 48 h 时的形态(×100，a：健康对照组，b：患者组)Figure 1-1 A549 cells induced by serum for 48 h(×100，a：healthy control，b：ALI patients)

附图 1-1 A549 细胞经血清诱导培养 48 h 时的形态(×100，a：健康对照组，b：患者组)Figure 1-1 A549 cells induced by serum for 48 h(×100，a：healthy control，b：ALI patients)a b

附图2-1 A549细胞经血清诱导培养48 h时的形态(×100，a：治疗前组，b：治疗 6 h 组，c：治疗 20 h 组)Figure 2-1 A549 cells induced by serum for 48 h(×100，a：pre-CBP，b：6-hour-CBP，c：20-hour-CBP)
【参考文献】

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本文编号：2842234