慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17RNA干扰对气道上皮细胞MMP-9表达及NF-κB活性的影响

发布时间：2020-10-16 15:12

　　 目的探讨脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的TNF-α/NF-κB信号转导机制及慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)RNA干扰(RNAi)对MMP-9表达的影响。方法构建ADAM17 siRNA慢病毒载体、包装重组慢病毒。以NF-κB抑制剂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)或TNF-α拮抗剂(etanercept)预处理HBE4-E6/E7细胞,以LPS刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以重组慢病毒感染HBE4-E6/E7细胞72 h后,以LPS或TNF-α刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以半定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;以酶联免疫吸附试验检测TNF-α蛋白含量;以Western blot检测MMP-9蛋白表达;以凝胶阻滞分析实验检测NF-κB活性。结果 LPS或TNF-α刺激均明显增加HBE4-E6/E7细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P0.05);etanercept和PDTC均明显抑制LPS诱导的MMP-9表达及NF-κB活性(P0.05)。慢病毒介导的ADAM17 RNAi明显降低LPS诱导的HBE4-E6/E7细胞上清液中TNF-α蛋白含量(P0.05),亦明显降低MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P0.05),但不能降低TNF-α诱导的MMP-9mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P0.05)。PDTC明显抑制TNF-α诱导的MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P0.05)。结论 TNF-α/NF-κB信号通路参与调控LPS诱导的气道上皮细胞MMP-9的表达,ADAM17通过调节TNF-α释放在其信号通路上游起到重要作用。
【文章目录】：
1 材料
    1.1细胞株
    1.2试剂和仪器
2 方法
    2.1 ADAM17 siRNA设计、质粒载体构建及慢病毒包装
    2.2细胞培养与分组
    2.3逆转录-聚合酶链反应
    2.4酶联免疫吸附试验
    2.5 Western blot
    2.6凝胶阻滞分析实验
    2.7统计学方法
3 结果
    3. 1Etanercept和PDTC对LPS诱导的HBE4-E6 / E7 细胞MMP-9 的表达及NF-κB活性的影响
    3.2慢病毒介导的ADAM17 RNAi对LPS诱导的MMP-9表达及NF-κB活性的影响
    3.3慢病毒介导的ADAM17 RNAi不能阻断TNF-α诱导的MMP-9表达及NF-κB活性
4 讨论

【参考文献】

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【共引文献】

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