AF-1对LPS诱导的巨噬细胞IL-10表达和分泌的影响

发布时间：2020-11-04 23:16

　　 革兰氏阴性菌感染是引起急性肺损伤的临床常见病因,革兰氏阴性菌内毒素主要成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)与体内相应受体结合后,在肺内启动多种信号级联放大系统,导致前炎因子、炎症介质、化学趋化因子、黏附分子等产生和释放。炎症因子大量释放入血,诱发炎症瀑布级联效应,导致炎症继续发展和放大；但在上述过程中,同时有抗炎介质如白细胞介素10(interleukin-10, IL-10)等的合成和释放,它们之间构成复杂的网络,调控炎症的发生、发展和转归。而IL-10在其中发挥着重要的病理生理学作用。 IL-10是一种具有抗炎作用的细胞因子,其主要生物活性表现为直接抑制炎症细胞活化,进而抑制细胞因子的产生。适时的、适度的IL-10的产生可以调节炎症的程度,并保护正常组织免受炎症损伤,在机体对抗感染的过程中发挥重要的保护性作用。肺泡巨噬细胞(Alveolar Macrophage)是肺内重要的免疫防御细胞,具有趋化、吞噬和杀菌作用,是炎症反应中炎症因子及IL-10的重要来源细胞。 Clara细胞是指衬覆于远端细支气管的非纤毛上皮细胞,其分泌蛋白(Clara cell secretory protein, CCSP,又称CC1O)属于子宫珠蛋白(uteroglobin,UG)家族；子宫珠蛋白是一种进化过程中高度保守的分泌性多功能非类固醇类激素蛋白,具有抗炎、抗氧化、免疫调节、肿瘤抑制及刺激胚胎生长的作用。AF-1 (Antiflammin-1, AF-1)是来源于子宫珠蛋白C末端第三个α螺旋的九肽,已有的研究证明AF-1具有明显的抗炎作用。但关于AF-1的抗炎作用是否与IL-10有关却未见报道。 目的： 1.观察AF-1对LPS诱导的巨噬细胞IL-10分泌及表达的影响。 2.检测巨噬细胞子宫珠蛋白结合蛋白(uteroglobin-binding protein, UGBP)的表达。 3.探讨UGBP在介导AF-1对LPS诱导的巨噬细胞IL-10分泌及表达影响中的作用,初步揭示AF-1的抗炎机制,为急性肺损伤的治疗提供新的线索和思路。 方法： 1.应用ELISA和RT-PCR法分别检测巨噬细胞培养上清液中IL-10蛋白含量和细胞IL-10mRNA表达,观察AF-1对LPS诱导的巨噬细胞IL-10表达的影响。 2.应用细胞免疫荧光技术及RT-PCR法检测UGBP在巨噬细胞的表达。 3.通过应用抗-UGBP抗体预处理巨噬细胞,观察抗-UGBP多抗对于AF-1引起的LPS诱导的巨噬细胞IL-10分泌及表达的影响。 结果： 1.LPS可诱导巨噬细胞IL-10的分泌和表达增加。AF-1对正常巨噬细胞IL-10的分泌和mRNA表达无影响,但可有效促进内毒素诱导的巨噬细胞IL-10的分泌和mRNA表达,并具有一定的时间、剂量依赖性。 2.免疫荧光及RT-PCR实验均证实在巨噬细胞上有UGBP的表达。 3.抗-UGBP抗体预处理可抑制AF-1促进内毒素诱导的巨噬细胞IL-10的分泌及mRNA表达增加的作用。 结论： 1.AF-1对正常巨噬细胞IL-10的分泌和mRNA表达无影响,但可有效促进内毒素诱导的巨噬细胞IL-10的分泌和mRNA表达,并具有一定的时间、剂量依赖性,提示AF-1抗炎作用的产生与调节IL-10的分泌和mRNA表达有关。 2.本实验首次证实巨噬细胞上有UGBP的表达。 3.本实验首次证实AF-1促进内毒素诱导的巨噬细胞IL-10的分泌及mRNA表达的效应有赖于UGBP的介导。
【学位单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R563
【部分图文】：

总R狱在1.2%琼脂糖凝胶电泳图

LPS作用不同时间对巨噬细胞IL10mRNA表达的影响

4加bp.困曰IL-10367bPGAPDH580bPIL10367bpGAPDH580bPMarkCrohZh4hsh12h24h图6LPS作用不同时间对巨噬细胞IL10mRNA表达的影响上图是对照组，下图是LPS组
【参考文献】

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1 翁翠莲;汪建新;;白介素-10对内毒素性肺损伤保护作用[J];国际呼吸杂志;2006年10期

2 许兵;刘少华;马可;徐鑫荣;;吸入一氧化碳对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织TNF-α和IL-10表达的影响及意义[J];南京医科大学学报(自然科学版);2006年08期

3 林栋栋,孙家邦,李非,张淑文,崔叶青,刘大川,朱斌,孙海晨,刘爽;IL-8、IL-10在大鼠急性胰腺炎并发肺损伤中的作用[J];首都医科大学学报;2005年02期

4 张君岚,刘艳梅,王殿华,凌亦凌,黄善生;IL-10抗内毒素气管内滴注致急性肺损伤作用的实验研究[J];中国病理生理杂志;2000年04期

5 李锦华,余学清,陈永雄,张仕光;白细胞介素10基因转移抑制肾小球系膜细胞诱生炎症细胞因子[J];中国病理生理杂志;1999年04期

6 李晓玫,戴振华,唐嘉薇,王海燕;白细胞介素10抑制肾系膜细胞磷脂酶A_2及其介导的前列腺素E_2释放的实验研究[J];中华医学杂志;1999年04期

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1 李金凤;AF-1对于内毒素诱导的中性粒细胞与内皮细胞粘附的影响及机制研究[D];中南大学;2008年

本文编号：2870753