罗红霉素保护LPS诱导的ALI，影响PAMNF-κB活化及TNF-α、IL-10释放的实验研究

发布时间：2020-11-13 04:44

　　 急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是指由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性进行性缺血性呼吸功能障碍，其严重阶段称为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)，迄今仍无满意的治疗措施，病死率高达50％以上。目前认为ALI是机体过度炎症损伤所致，是机体众多效应细胞(如巨噬细胞、中性粒细胞等)和炎症介质级联(cascade)反应作用的结果。在机体的炎症反应过程中存在抗炎和促炎作用，如果机体保持抗炎与促炎的动态平衡，机体生理功能正常。如果细胞因子(cytokine,CK)、趋化因子等炎症介质产生过量，超过机体自身防御需要量，炎症介质会削弱机体的保护屏障，产生炎症损伤。在ALI发病过程中具体表现在促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1、IL-6等增多，而此时机体的抗炎因子IL-10等相对不足，炎性CK以级联放大的作用方式诱发其它介质释放，造成肺毛细血管通透性增加、间质水肿、中性粒细胞渗出等一系列炎症损伤。因此寻找既能抑制炎症损伤，而又不影响机体的自身防御机制，以达到防治ALI的免疫调节物质就成为关键。肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophage,PAM)是肺泡腔内的常驻巨噬细胞，广泛分布于肺泡内及气道上皮表面，是肺部防御病原微生物和损伤的第一道防线，在ALI的早期发病中起着重要角色。罗红霉素(Roxithromycin,RM)是新型大环内酯类抗生素，在巨噬细胞内的药物浓度是细胞外液的10-20倍。最近有报道认为RM不仅有抗菌作用，还具有调节免疫功能的作用。RM对ALI发病过程中的炎症损伤是否有作用引起了我们的兴趣。在实验中我们用动物实验、细胞培养、EMSA等方法研究了RM对LPS诱导的大鼠ALI有无影响及其机制，以及RM对PAM NF-κB活化和对TNF-α、IL-10释放影响和机制。 实验方法：54只SD大鼠随机分为：(1)正常对照组(N组)，经胃灌入生理盐水10mg·kg~(-1)；(2)内毒素组(L组)，静脉注射LPS 2mg·kg~(-1) 第四军医大学硕士学位论文 一 建立大鼠急性肺损伤（ALI）模型，经胃灌入生理盐水 10 mL·kg－‘；p） 罗红霉素治疗组m组L静脉注射 LPS 2 mg·kg“’后，经胃灌入罗红霉 素 20 mg止g“’；测定各组平均动脉压，动脉血气；测定支气管肺泡灌洗液 和血浆中的总蛋白，计算肺通透性指数；计算肺系数，肺水含量：测定血 清和 BALF重 TNF－a和 ILIO，观察各组肺组织病理学改变。用支气管肺 泡灌洗（BAL）收集并培养大鼠 PAM，实验分山正常对照组⑤生理盐 水）；（2）L组（予 LPS 10 u g·mL’刺激）；（3） RI组（给予 2 u g mL－’RM 禾 LPS u g·mL’同时刺檄）：（4） RZ组（给予 20 u g·mL刁 ILNI和 LPS 卜g·mL‘同时刺激）：（5）＊3组（给予200 卜g·m厂‘IO4和LPS 10卜g·n】L’同时中激）。分另于中激前（oh），刺激后（lh。Zh、3h、4h） 留取细胞及细胞培养上清，用凝胶电泳迁移率改变分析（EMSA）法和 AIA法分别检测核提取物中 NF－。B活性和细胞培养卜清中 TNF．a、豆LIO 含量。实验结果如下： 1．RM对 LPS诱导的大鼠 ALI MAP的影响 静脉注射LPS后，MAP立即下降，smin降至最低点门．9410．57kPa。，s 14．＊过＊．P＜0＊），而后回升，1．＊ 升高达峰值（1658士1＊旺a），之后 逐渐下降，4h后 MAP显着下降（7．55t0．99kPays 13＊6if．03kPa，尸、0＊5）， 大鼠出现低血压。用 LPS刺激后给予RM组MAP虽在 smin时下降 （8561063kPa），但回升后不再降低，PAA4稳定维持在13．7911．14kPa， 411时与正常组（13．06工l。03kPI）无差另（P＞0刀5）。 2．RM对LPS诱导的大鼠ALI血气指标影响 静注 LPS 120min PaO。显着下降o＜0刀5X 至240min时维持在较低 的水平门．7010．96kPah 与 L组比较使用 RM干预后 120min时 PaO。由 13．18if石skPa降低至9．78土0．98kPa，240min时PaOZ 回升至门．13ti．35 kPa。静注 LPS PaCO。4h时明显降低（P＜0＊5）；使用 I（干预在 120 ＊in、 240minPaCO。与模型组无明显差别（P＞0刀5 ）o 3．Ilf对ALI肺水肿参数的影响 与正常组相比L组大鼠肺系数（0．67土0．04。，S 0．45士0．02，P＜0刀5）、月 水含量（82．sll3．87，S 76．3210．48．尸＜0＊5）、LPI明显升高；经 RM干预 －3－ 第四旱医大单硕士学位论文 一 后的大鼠与L组相比肺系数、肺水含量降低（尸＜0刀5），＊N有明显改善
【学位单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R563.8
【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言
文献回顾
实验内容
    第一部分 罗红霉素对LPS诱导的大鼠ALI模型的影响
    第二部分 红霉素对LPS诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化及INF-α、IL-10释放的实验研究
小结
致谢
附录
参考文献

【参考文献】

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本文编号：2881744