哮喘发生机制及葛根素干预研究

发布时间：2020-11-19 20:13

　　 目的1.构建过敏性支气管哮喘大鼠模型。2.在哮喘大鼠第一次哮喘发作前给予药物干预，探讨葛根素对大鼠实验性哮喘有无预防作用。3.在哮喘大鼠第一次哮喘发作后给予药物干预，探讨葛根素对大鼠实验性哮喘有无治疗作用。 方法1.将20只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组和哮喘模型组。哮喘模型组采用OVA（ovalbumin,卵清蛋白）+氢氧化铝凝胶致敏3次后，OVA激发1次建模，正常对照组以NS（normal saline，生理盐水）为替代品致敏和激发。建模后通过观察大鼠行为学改变，检测BALF（broncho-alveolar lavage fluid，支气管肺泡灌洗液）中炎性细胞构成，肺组织病理学，细胞因子水平，血流变，动脉血气，凝血四项等对模型建立成功与否进行评价。2.将50只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为5个实验组，分别为正常对照组，哮喘对照组，哮喘PUE（puerarin,葛根素）预防组，哮喘PUE+DEX预防组，哮喘DEX（dexamethasone，地塞米松）预防组。除正常对照组外，其余各组大鼠分别于第0、7、14天腹腔注射OVA+氢氧化铝凝胶混合物1ml致敏；第21天将大鼠用乙醚麻醉后气道内滴入1%的OVA200μl进行激发。正常对照组：以NS为替代品进行致敏和激发。自第15天至第20天，各组大鼠分别接受以下干预：①正常对照组：1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射；②哮喘对照组：1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射；③哮喘PUE预防组：100mg/kg葛根素灌胃+1ml NS腹腔注射；④哮喘PUE+DEX预防组：100mg/kg葛根素灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射；⑤哮喘DEX预防组：1ml NS灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射。第22天处死大鼠，检测各组大鼠炎症指标（BALF中炎症细胞计数、肺组织病理学、炎症因子等）及凝血指标（凝血四项及外源性、内源性凝血因子活性等）的改变，评价葛根素对大鼠实验性哮喘有无预防作用及其疗效。3.将50只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为5个实验组，分别为正常对照组，哮喘对照组，哮喘PUE治疗组，哮喘PUE+DEX治疗组，哮喘DEX治疗组。除正常对照组外，其余各组大鼠分别于第0、7、14天腹腔注射OVA+氢氧化铝凝胶混合物1ml致敏；第21天将大鼠用乙醚麻醉后气道内滴入1%的OVA200μl进行激发；第28天将大鼠用乙醚麻醉后气道内滴入0.5%的OVA200μl激发。正常对照组：以NS为替代品进行致敏和激发。自第22天至第27天，各组大鼠分别接受以下干预：①正常对照组：1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射；②哮喘对照组：1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射；③哮喘PUE治疗组：100mg/kg葛根素灌胃+1ml NS腹腔注射；④哮喘PUE+DEX治疗组：100mg/kg葛根素灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射；⑤哮喘DEX治疗组：1ml NS灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射。第29天处死大鼠，检测各组大鼠炎症指标（BALF中炎症细胞计数、肺组织病理学、炎症因子等）及凝血指标（凝血四项及外源性、内源性凝血因子活性等）的改变，评价葛根素对大鼠实验性哮喘有无治疗作用及其疗效。 结果1.大鼠哮喘模型观察：与正常大鼠相比，哮喘大鼠BALF中总细胞计数及嗜酸细胞百分比(P0.01，P0.01)显著增高，肺组织病理切片，炎症因子(TNF-α(P0.01)、IFN-γ(P0.01))，血气分析(PaO2(P0.05)、SaO2(P0.05))等均有显著的改变。2.葛根素对大鼠过敏性哮喘预防作用观察：在炎症指标方面，葛根素能够有效的减轻哮喘大鼠气道炎症（BALF中总细胞计数及嗜酸细胞百分比(P0.01，P0.01)，肺组织病理学改变显著减轻，血清IL-10水平升高，肺组织IL-10mRNA基因表达上调），但效果不及地塞米松；在凝血指标方面，葛根素能够有效的纠正哮喘大鼠凝血平衡紊乱（PT(P0.01), TT(P0.05), FIB(P0.01)；FII(P0.01), FV(P0.05), FVII(P0.05), FX(P0.05), FVIII(P0.01), FIX(P0.05),FXII(P0.05)），显著下调FVII mRNA基因表达水平(P0.01),且效果优于地塞米松。3.葛根素对大鼠过敏性哮喘治疗作用观察：在炎症指标方面，葛根素能够有效的减轻哮喘大鼠气道炎症（BALF中总细胞计数及嗜酸细胞百分比(P0.01，P0.01)，肺组织病理学改变显著减轻，血清IL-10水平升高，肺组织IL-10mRNA基因表达显著上调(P0.01)），但效果不及地塞米松；在凝血指标方面，葛根素能够有效的纠正哮喘大鼠凝血平衡紊乱（PT(P0.01), TT(P0.05), FIB(P0.05)；FII(P0.05), FVII(P0.05), FX(P0.05), FVIII(P0.01), FXII(P0.01)），显著下调FVII mRNA基因表达水平(P0.01),且效果优于地塞米松。 结论1.本实验成功的建立了过敏性哮喘大鼠模型；2.葛根素能够有效地预防大鼠过敏性哮喘；3.葛根素能够有效地治疗大鼠过敏性哮喘。
【学位单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R562.25
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
研究背景
    参考文献
第一部分 过敏性哮喘大鼠模型的建立
    一. 前言
    二. 实验材料
    三. 实验方法
    四. 实验结果
    五. 讨论
    参考文献
第二部分 过敏性哮喘大鼠模型的优化
    一. 前言
    二. 实验材料
    三. 实验方法
    四. 实验结果
    五. 讨论
    参考文献
第三部分 葛根素对大鼠过敏性哮喘的预防作用研究
    一. 前言
    二. 实验材料
    三. 实验方法
    四. 实验结果
    五. 讨论
    参考文献
第四部分 葛根素对大鼠过敏性哮喘的治疗作用研究
    一. 前言
    二. 实验材料
    三. 实验方法
    四. 实验结果
    五. 讨论
    参考文献
综述：过敏性哮喘动物模型的研究现状
    参考文献
综述：哮喘与凝血
    参考文献
附录：英文缩略词表
攻读硕士期间发表论文
致谢

【参考文献】

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本文编号：2890386