水通道蛋白4及黏蛋白5AC在哮喘小鼠支气管肺组织的表达及意义

发布时间：2017-04-06 20:08

本文关键词：水通道蛋白4及黏蛋白5AC在哮喘小鼠支气管肺组织的表达及意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：观察水通道蛋白4(AQP4)和黏蛋白5AC(MUC5AC)在哮喘小鼠支气管肺组织的表达，以及地塞米松对其表达的影响，探讨AQP4和MUC5AC在哮喘发病机制中的作用。方法：将24只5周龄清洁级C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、哮喘组和地塞米松治疗组(DEX组)，每组8只。哮喘模型组：第0d及14d腹腔注射新鲜配制的卵蛋白(OVA)与氢氧化铝混悬溶液0.2ml(1g/LOVA+10g/L氢氧化铝)致敏，第2l、22和23d予以1g/LOVA溶液50μL滴鼻吸入激发。DEX组：致敏及激发同哮喘组，但在每次滴鼻激发前30min予地塞米松1.0mg/kg腹腔注射。正常对照组：给予相同体积的生理盐水以同样的方法腹腔注射及滴鼻。于末次激发24h后处死小鼠，取肺组织行苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织形态学的改变，阿辛蓝-过碘酸-雪夫染色法(AB-PAS)观察气道杯状细胞增生和黏液分泌情况，采用病理评分法评价各组小鼠支气管肺组织的病理改变；免疫组织化学染色法检测支气管肺组织中AQP4和MUC5AC蛋白的表达；实时荧光定量PCR法检测AQP4和MUC5ACmRNA的表达，以SYBR-greenⅠ作荧光指示剂，检测AQP4和MUC5AC及管家基因β-actinmRNA的量，采用双ΔΔCt法计算各组目的基因的相对表达量。统计学处理采用SPSS13.0软件，各组计量资料的数据采用均数±标准差(x±s)表示，组间差异显著性检验采用单因素方差分析，两组间比较采用SNK法检验，两变量间的相关性采用直线相关分析，P0.05为差异具有统计学意义。结果：⑴HE染色：哮喘组小鼠支气管、细支气管黏膜下和血管周围有大量炎症细胞浸润，黏膜下水肿，管腔狭窄，管腔内可见黏液栓，气道上皮细胞脱落，气道平滑肌增厚；DEX组上述病理改变较哮喘组明显减轻；对照组未见上述病理改变。肺组织病理学评分哮喘组(4.2±0.676)明显高于对照组(0.6±0.507)，差异具有统计学意义(P0.05)，DEX组评分(2.4±0.737)低于哮喘组，但仍高于对照组，差异具有统计学意义(P0.05)。⑵AB-PAS染色：哮喘组小鼠气道有大量杯状细胞增生，染色胞浆呈蓝色和紫红色，管腔内可见大量黏液分泌；DEX组较哮喘组明显减轻，对照组黏液分泌不明显。病理评分哮喘组(3.4±0.672)明显高于对照组(0.7±0.723)，差异有统计学意义(P0.05)；DEX组评分(2.1±0.545)低于哮喘组，差异有统计学意义(P0.05)。⑶免疫组化染色：AQP4主要表达于大小气道上皮细胞基底部和血管周围，Ⅰ型肺泡上皮细胞，哮喘组AQP4表达明显低于对照组，DEX组较哮喘组表达增强，但仍低于对照组。MUC5AC主要表达于气道黏膜下基底层，哮喘组表达呈强阳性，地塞米松组表达较哮喘组减弱，但仍高于对照组。⑷实时荧光定量PCR：哮喘组AQP4mRNA相对表达量(1.1923±0.1933)明显低于对照组(4.4220±2.1953)及DEX组(2.4132±1.0997)，差异具有统计学意义(P0.05)；与对照组比较，DEX组AQP4mRNA表达量仍减少，差异有统计学意义(P0.05)。哮喘组MUC5ACmRNA相对表达量(9.1876±3.0894)明显高于对照组(1.0945±0.1920)及DEX组(2.7621±1.8449)，差异有统计学意义(P0.05)，，DEX组MUC5ACmRNA表达量仍较对照组高，差异有统计学意义(P0.05)。⑸相关性分析：哮喘组和DEX组AQP4与MUC5ACmRNA表达量呈显著负相关(r＝-0.758，-0.591，P均0.05)。结论：⑴成功建立了C57BL/6小鼠哮喘模型；⑵OVA致敏/激发的哮喘小鼠存在气道炎症和黏液高分泌；⑶OVA致敏/激发的哮喘小鼠支气管肺组织AQP4表达降低，MUC5AC表达增高，二者呈负相关关系，可能参与了哮喘小鼠气道炎症和黏液高分泌的病理生理过程。⑷地塞米松能上调AQP4的表达和下调MUC5AC的表达，可能是其抑制哮喘小鼠气道炎症和气道黏液高分泌的机制之一。
【关键词】：支气管哮喘 水通道蛋白4 黏蛋白 黏液高分泌
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R562.25
【目录】：