TLR4/TRIF信号转导通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌中的作用

发布时间：2020-12-09 00:12

　　第一部分吸入LPS对哮喘小鼠气道炎症和气道黏液分泌的影响目的观察吸入脂多糖（LPS）对哮喘小鼠气道炎症和气道黏液分泌的改变方法清洁级BALB/c小鼠30只随机分为三组：哮喘组（AST组）10只、LPS哮喘组（LPS组）10只和正常组（NS组）10只,哮喘组用卵清白蛋白（OVA）致敏和激发制作哮喘模型,LPS哮喘组在哮喘模型的基础上加用LPS（50ug/ml）雾化吸入30分钟,正常组用生理盐水代替OVA。检测NS组、AST组及LPS组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞总数和细胞分类计数,采用ELISA检测BALF中的IL-4和TNF-α水平,HE染色观察肺部病理学改变,用阿尔辛蓝—过碘酸雪夫（AB-PAS）染色气道杯状细胞,免疫组织化学法检测肺组织中黏蛋白5ac（Muc5ac）以及TLR4的表达,荧光定量RT-PCR检测Muc5acmRNA和TLR4 mRNA在肺内的表达,Western-blotting检测气道muc5ac和TLR4蛋白含量。结果AST组及LPS小鼠较NS组小鼠在BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞百分比,IL-4和TNF-α水平、肺组织AB-PAS... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

小鼠哮喘模型及LPS刺激哮喘模型制备示意图

图2.小鼠支气管肺泡灌洗2.3BALF细胞总数计数及白细胞分类吸6ulBALF滴于计数板上，10倍镜下分别数计数板一侧4角大方格之内的细胞数，按公式:N/4x106，计算细胞总数。将剩余BALF离心(4℃，1500rPmxIOmin)，取沉淀涂片，常规瑞氏一吉姆萨复合染色，单盲法40倍镜下至少200个细胞做嗜酸性粒细胞、淋巴及单核细胞分类。2.4肺组织病理学检查2.4.1石蜡块的制作(l)将己固定的肺组织(固定时间不超过24小时)置于50%乙醇12小时。(2)置于70%乙醇4小时。(3)置于80%乙醇30分钟。(4)置于90%乙醇30分钟。

图3核酸蛋白测量仪测量RNA浓度及OD值(2)将提取的RNA样品用RNANase一free水稀释为等体积等浓度工作液浓度(50ng/川)，分装于数个EP管，放入一80℃冰箱保存，以备进行荧光定量RFPCR测定。2.7.2RNA逆转录成cDNARNA逆转录成cDNA按试剂盒说明书进行，反应体系如下:成分使用量终浓度2闰2X25Pmol50Pmol，..二‘..几11.旧1.林抖林林一、口一、︺一、Jt工Jn口00sxPrimeseriptTMBurrer(伪rRealTime)PrimeseriptTMRTEnzymeMixloxigodTPrimer(souM)’1Random6mers(1oouM)’1TotalRNA


本文编号：2905930