Fas-siRNA对Fas/FasL依赖的LPS诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡和炎症反应的影响

发布时间：2020-12-22 23:20

　　目的通过建立LPS诱导体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤模型,探讨1、Fas-siRNA转染肺泡Ⅱ型上皮细胞的可行性;2、Fas-siRNA对Fas/FasL依赖的LPS诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡和炎症反应的影响。方法经分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,随机分为5组:空白组:AECⅡ（仅加脂质体）、AECⅡ+siRNA-213组、AECⅡ+siRNA-641组、AECⅡ+siRNA-830组、AECⅡ+阴性对照siRNA组。6h后观察转染效率,48h后RT-PCR检测Fas mRNA表达。肺泡Ⅱ型上皮细胞分为5组:对照组、LPS组、LPS+FasL组、FasL组、LPS+FasSiRNA+FasL组,转染FasSiRNA后20小时,加入LPS和FasL,加入PBS为每孔容积1ml,终浓度分别为10ug/ml和5ng/ml,继续培养48小时,RT-PCR、Westen Blot检测Fas的表达,Westen Blot检测p-caspase8,流式检测细胞凋亡,ELISA检测培养液上清MCP-1和TNF-a的浓度。结果1、siRNA转染效率超过80%,与空白组与阴性对照组比较,AECⅡ+siRNA... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【部分图文】：

AKP染色大鼠肺泡n型上皮细胞

图4不同处理后FaSmRNA的表达。与C组比较，*P<0.05与LPS组比较#p<0.05Fas蛋白表达月娜祖湘:匕篡骤︸︸切肠和5572始3426图5、不同处理后Fas蛋白的表达。与C组比较，*P<0.05与LPS组比较，#p(0.05与control组比较，LPS组、FasL组、LPS+FasL组、LPS+FaSSIRNA+组p一caspases表达增加，<0.05);与LpS组比较，LpS+FasL组p一caspas

图5、不同处理后Fas蛋白的表达。与C组比较，*P<0.05与LPS组比较，#p(0.05与control组比较，LPS组、FasL组、LPS+FasL组、LPS+FaSSIRNA组p一caspases表达增加，<0.05);与LpS组比较，LpS+FasL组p一casp达增加切<0.05);与LpS+FasL组比较LpS+FassiRNA+FasL组p一easpase减少切<0.05)(如图6)。深︸樱﹃︸嘟瞬樱仍72璐43拟，，，，，，，，r.”旧.r侣侣，，:一反爪汾汾汾汾汾汾汾令八离离产产哀厂厂丫丫“““了了了

【参考文献】：
期刊论文
[1]TNF-α信号传导通路的分子机理[J]. 丘创华,侯敢,黄迪南.  中国生物化学与分子生物学报. 2007(06)
[2]利多卡因对LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用[J]. 徐道妙,明广峰,吴晓英,陈胜喜.  中南大学学报(医学版). 2006(02)
[3]沐舒坦对吸入性肺损伤大鼠的肺保护作用[J]. 赵双平,郭曲练,艾宇航,王瑞珂,王锷,贺民.  中国危重病急救医学. 2005(06)
[4]肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离纯化及原代培养[J]. 曾庆富,蒋海鹰,钱仲,孙去病.  中华病理学杂志. 1998(05)
[5]利多卡因预先给药对LPS诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-A表达的影响[J]. 马新华,徐道妙,明广峰,艾宇航,郭曲练.  中华麻醉学杂志. 2007 (11)



本文编号：2932625