肺炎克雷伯菌噬菌体解聚酶克隆表达及抗菌活性研究

发布时间：2021-01-04 11:20

　　目的肺炎克雷伯菌是引起医院获得性感染的常见革兰氏阴性条件致病菌之一。自上世纪80年代随着耐药性肺炎克雷伯菌出现,多重耐药肺炎克雷伯菌造成的复杂感染治疗愈加困难。随着全耐药性肺炎克雷伯菌的报道不断增多,迫使我们寻求治疗耐药性肺炎克雷伯菌感染的新型治疗策略与方法。本研究以荚膜型KN1型菌株Kp409为宿主菌,成功分离并鉴定一株裂解性噬菌体IME321,并对其进行全基因组高通量测序及相关生物信息学分析。在体外克隆表达噬菌体解聚酶、明确其抗菌活性后,在小鼠感染模型中评估该解聚酶的治疗及预防效果。方法以临床分离的肺炎克雷伯菌Kp409为宿主菌,从解放军总医院第五医学中心南院区（原解放军307医院）未经处理污水中筛选噬菌体;利用双层平板培养法测定噬菌体IME321的滴度,同时绘制噬菌体的最佳感染复数及一步生长曲线;经透射电镜观察负染法处理的噬菌体形态;提取噬菌体核酸,利用Ilumina Miseq高通量测序平台对噬菌体IME321进行全基因组测序,并进行有关生物信息学分析。PCR扩增噬菌体IME321解聚酶基因ORF42,将目的基因克隆进pEasy-BluntE1Expression Vector... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

IME321在Kp409铺双层平板所形成的噬菌斑块和晕环A：感染24h后，噬菌斑的周围出现半透明晕环，并随着时间的延长而扩大

图 2 噬菌体 IME321 透射电镜下形态Fig 2 Transmission electron microscopy of phage IME321染复数I分别为0.01、0.1、1、10和100混合噬菌体原液和宿主菌液培养

噬菌体IME321一步生长曲线


本文编号：2956678