miR-34a对CSE诱导的人肺微血管内皮细胞凋亡的影响

发布时间：2017-04-11 01:21

  本文关键词：miR-34a对CSE诱导的人肺微血管内皮细胞凋亡的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨CSE干预对HPMEC凋亡及miR-34a表达的影响；并进一步研究miR-34a对CSE诱导的HPMEC凋亡的影响。 方法：体外培养HPMEC,给予不同浓度(0%、0.5%、1%、2.5%、5%)及不同时间(Oh、6h、12h、24h)的CSE干预,采用Annexin-V FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率,Real-time PCR检测miR-34a-5p与miR-34a-3p的表达,并分析HPMEC早期凋亡率和miR-34a-5p与miR-34a-3p表达之间的相关性。进一步将HPMEC分为四组,各组细胞处理如下：对照组(CSE组)不予处理；miR-34a inhibitor阴性对照转染组(N+CSE组)转染miR-34a inhibitor的阴性对照；miR-34a-3p inhibitor转染组(3p+CSE组)转染miR-34a-3p inhibitor; miR-34a-5p inhibitor转染组(5p+CSE组)转染miR-34a-5p inhibitor。各组细胞予以相应处理后再均以1%CSE干预12h,然后检测各组细胞的凋亡率及miR-34a的表达水平。各组计量资料以(M±SD)表示,采用SPSS18.0对相关数据进行统计分析,P0.05为有统计学意义。 结果： 1.CSE诱导的HPMEC凋亡呈浓度依赖性,随着CSE干预浓度从0%增加到1%,HPMEC的早期凋亡率逐渐增加(P0.05),1%CSE浓度组的HPMEC早期凋亡率为(36.23±4.20)%；1%、2.5%CSE组的HPMEC早期凋亡率的差异无统计学意义(P0.05);5%CSE组HPMEC早期凋亡率较2.5%CSE组下降(P0.05)。1%CSE诱导的HPMEC凋亡呈时间依赖性,随着1%CSE干预时间从Oh延长到12h,HPMEC早期凋亡率逐渐增加(P0.05);1%CSE干预24h组HPMEC的早期凋亡率较12h组稍下降,差异无统计学意义(P0.05)。 2.随着CSE干预浓度从0%增加到2.5%,miR-34a-5p、 miR-34a-3p的相对表达量增加(P0.05);2.5%CSE浓度组miR-34a-5p、miR-34a-3p的相对表达量分别为(16.05±0.389)×10-3、(0.75±0.034)×10-3;5%CSE组miR-34a-5p、miR-34a-3p的相对表达量较2.5%CSE组下降(P0.05)；随着1%CSE干预时间从0h延长到12h,miR-34a-5p、miR-34a-3p的相对表达量增加(P0.05)；1%CSE干预24h组miR-34a-5p、miR-34a-3p的相对表达量较12h稍下降,差异无统计学意义(P0.05)。 3. HPMEC早期凋亡率与miR-34a表达的相关性分析结果显示HPMEC中miR-34a-5p的相对表达量与其早期凋亡率呈正相关(r=0.97,P0.001), miR-34a-3p的相对表达量与其早期凋亡率呈正相关(r=0.92,P0.01)。 4.5p+CSE组和3p+CSE组HPMEC早期凋亡率分别为(34.08±1.29)%、(33.58±0.93)%,较N+CSE组HPMEC早期凋亡率(44.52±1.39)%明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。 结论： 1.CSE诱导HPMEC早期凋亡率和miR-34a的表达增加,且具有CSE干预的浓度和时间依赖性。 2.CSE诱导的HPMEC早期凋亡率和miR-34a的表达呈正相关。 3.miR-34a抑制物能减少CSE所致的HPMEC早期凋亡率,miR-34a在CSE所致HPMEC凋亡中可能具有重要作用。
【关键词】：人肺微血管内皮细胞 凋亡 miR-34a 香烟提取物
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• ~.略词表12-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 材料与方法16-26
• 2.1 细胞株16
• 2.2 主要设备和试剂16-18
• 2.3 主要溶液配制18-19
• 2.4 实验方法19-25
• 2.5 统计分析25-26
• 第三章 结果26-38
• 3.1 HPMEC细胞的形态26
• 3.2 CSE干预对HPMEC凋亡的影响26-30
• 3.3 CSE干预对HPMEC中miR-34a表达的影响30-33
• 3.4 HPMEC凋亡率与miR-34a表达的相关性分析33
• 3.5 miR-34a抑制实验33-38
• 第四章 讨论38-44
• 4.1 选择HPMEC及CSE干预进行细胞实验的原因38-39
• 4.2 CSE干预后HPMEC的早期凋亡率的变化情况39
• 4.3 CSE干预HPMEC后miR-34a的表达情况39-41
• 4.4 miR-34a与HPMEC早期凋亡率的相关性41
• 4.5 miRNA inhibitor干预miRNA功能的原理及应用41-44
• 第五章 结论44-45
• 参考文献45-51
• 综述51-62
• 参考文献57-62
• 攻读学位期间主要研究成果62-63
• 致谢63

【共引文献】

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本文编号：298000