苦参碱通过调控Nrf2对人胚肺成纤维细胞γ-GCS表达的影响

发布时间：2017-04-11 04:15

  本文关键词：苦参碱通过调控Nrf2对人胚肺成纤维细胞γ-GCS表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：氧化/抗氧化失衡在肺纤维化发病机制中发挥着重要的作用。γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS）是谷胱甘肽（glutathione,GSH）合成反应的限速酶，认为是非常重要的抗氧化酶；体外细胞学培养研究认为红系衍生核因子相关因子-2（NF-E2related factor2,Nrf2）可以调控抗氧化酶的表达。本实验室前期动物实验研究表明苦参碱具有抗炎、抗纤维化作用，但其调控Nrf2表达的具体机制不明。 目的：本研究探讨苦参碱通过调控Nrf2对人胚肺成纤维细胞γ-GCS表达的影响，为寻找有效的抗肺纤维化药物提供临床治疗的实验基础。 方法：体外培养的人胚肺成纤维细胞MRC-5至指数生长期，分为空白对照组、苦参碱组、苦参碱+SiRNA干预组。空白对照组为A组：细胞使用MEM/NEAA培养基加10％FBS(Hyclone)培养；苦参碱组：正常培养的人胚肺成纤维细胞加入苦参碱；苦参碱+SiRNA干预组：正常培养的人胚肺成纤维细胞加入苦参碱并加入SiRNA沉默Nrf2mRNA。根据苦参碱浓度进行亚分组：苦参碱组中0.25mmol/LMat为B组、0.5mmol/LMat为C组、1.0mmol/LMat为D组；苦参碱+SiRNA干预组中0.25mmol/L Mat为E组、0.5mmol/LMat为F组、1.0mmol/LMat为G组。以上各组细胞，经苦参碱处理1、2、4、8小时后，细胞Nrf2、γ-GCSmRNA表达水平使用RT-PCR检测，，细胞Nrf2、γ-GCS蛋白表达水平使用Western blot检测。 结果： （1）人胚肺成纤维细胞中γ-GCSmRNA、Nrf2mRNA表达：A组低于B、C、D组（P＜0.05）；表达随Mat浓度增大呈上升趋势，以4h较高，第8h较低，但仍高于空白组（P＜0.05）。 （2）人胚肺成纤维细胞中γ-GCS蛋白、Nrf2蛋白表达：A组低于B、C、D组（P＜0.05）；表达随Mat浓度增大呈上升趋势，以4h较高，第8h较低，但仍高于A组（P＜0.05）；人胚肺成纤维细胞中γ-GCS蛋白质及mRNA表达，E、F、G组分别低于B、C、D组（P＜0.05）；且均低于A组（P＜0.05）。 （3）人胚肺成纤维细胞中γ-GCS的表达与Nrf2mRNA、蛋白表达呈正相关。 结论： 苦参碱可通过调控Nrf2的表达上调人胚肺成纤维细胞内源性抗氧化酶γ-GCS的表达。
【关键词】：肺纤维化 红系衍生核因子相关因子-2 谷氨酰半胱氨酸合成
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R563
【目录】：

• 主要英文缩略语索引4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-18
• 结果18-28
• 讨论28-31
• 结论31-32
• 参考文献32-36
• 综述36-41
• 参考文献39-41
• 硕士期间撰写论文41-42
• 致谢42

【参考文献】

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本文编号：298297