miR-145/SMAD3轴在慢性阻塞性肺疾病中的作用和机制研究

发布时间：2021-02-14 03:59

　　目的探讨miR-145通过SMAD3调节慢性阻塞性肺疾病（COPD）的发生及机制。方法检测延安大学附属医院有COPD的吸烟者、无COPD的吸烟者、无COPD的未吸烟者肺组织中miR-145、SMAD3的表达水平。用20%CEM处理支气管上皮细胞后,构建COPD的细胞模型,将miR-145 mimics/inhibitor转染该细胞后,通过ELISA方法检测细胞上清中IL-6、IL-8、IL-10表达水平,RT-PCR、Western blot检测SMAD3、IL-6、IL-8、IL-10和ECM降解相关蛋白MMP-9、EMMPRIN以及P13K、Akt、mTOR的表达,CCK-8法检测细胞的增殖情况。通过双荧光素酶报告基因实验检测SMAD3与miR-145的靶向关系,同时,将pEGFP-N1-SMAD3转染COPD模型细胞后,RT-PCR、Western blot检测IL-6、IL-8、IL-10、MMP-9、EMMPRIN及P13K、Akt、mTOR的表达。结果有COPD的吸烟者肺组织中miR-145低表达、SMAD3高表达;miR-145能够抑制COPD模型细胞IL-6、IL-8、... 

【文章来源】：实用药物与临床. 2020,23(12)

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

RT-PCR检测不同样品肺组织中miR-145、SMAD3的表达

首先,通过TargetScan、miRanda和PicTar数据库分析比对,结果显示,SMAD3-3’UTR中包含了能够与miR-145完全互补的一段序列(图5A)。荧光素酶活性分析实验结果显示,miR-145 mimics+pGL3-SMAD3-3’UTR-WT组与NC mimics+pGL3-SMAD3-3′UTR-WT组比较,荧光素酶活性显著降低,而突变型两组相比荧光素酶活性没有显著变化(图5B)。然后,将miR-145 mimics /inhibitor转染支气管上皮细胞后,RT-PCR和Western blot结果显示,miR-145 mimics组与NC mimics组比较,miR-145 mimics能够抑制SMAD3的表达(图5C～D),miR-145 inhibitor组与NC inhibitor 组比较,与以上结果完全相反(图5C～D)。图3 RT-PCR、Western blot方法检测miR-145 mimics/inhibitor对MMP-9、EMMPRIN表达的影响

RT-PCR、Western blot方法检测miR-145 mimics/inhibitor对MMP-9、EMMPRIN表达的影响

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3033076