自噬活性对大鼠肺纤维化的影响及其机制初探

发布时间：2021-03-26 02:53

　　目的本课题旨在通过博来霉素诱导大鼠发生肺纤维化,探究自噬活性对肺纤维化的影响及其可能机制,为进一步阐明肺纤维化发病机制提供实验依据。方法将12只Wistar雄性大鼠按随机数字表法平均分为对照组（A组）和实验组（B组）,每组各6只。每次将3只大鼠放入雾化装置内,雾化15分钟,根据体重换算雾化体积3-4ml,每天雾化一次,持续雾化3天,实验组雾化吸入浓度为1mg/ml博来霉素（每次剂量5mg/kg）,对照组雾化吸入等量生理盐水。雾化给药后第25天进行葡萄糖耐量测定;第28天收集大鼠血清、支气管肺泡灌洗液和肺组织标本。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清胰岛素含量和支气肺泡灌洗液AMPK含量;苏木精-伊红染色（HE）观察肺组织病理改变;Masson染色法观察肺组织胶原纤维生成;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺纤维化相关指标?-平滑肌肌动蛋白（?-SMA）、自噬相关标志物p62、LC3Ⅱ/Ⅰ和信号通路相关蛋白及其调控蛋白p-Akt、mTOR、p-mTOR、PTEN和OTUD3的相对表达量。结果（1）实验组和对照组大鼠体重均呈持续增长趋势,各时间点差异无统计学意义（P>... 

【文章来源】：福建中医药大学福建省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

自噬参与肺纤维化的机制设想图

（4）室温下血液自然凝固15-20分钟后，于4℃，3000rmp条件下离心20分钟，收集上清液分装于不同EP管中，并做好标记，保存于-20℃冰箱中。图1-2 大鼠腹主动脉采血2.3.3 大鼠支气管肺泡灌洗液制备：（1）用剪刀沿大鼠胸骨正中线剪开胸腹腔皮肤至颈部，逐层分离皮下组织。（2）首先将膈肌剪开，见肺脏组织塌陷后，直剪以剑突下方为起点，避开胸壁内血管后沿胸骨中线向上剪开胸腔，充分暴露气管、心肺及纵膈组织。（3）首先使用2.5毫升注射器抽取1.5毫升4℃生理盐水并注满采血针橡胶管，放置一旁。分离气管表面薄层组织，使用缝合线结扎右主支气管，在气管中段气管环处作一横行切口，将采血针插入气管内，使用缝合线两头固定采血针。（4）注射器缓慢将生理盐水注入气管内，见左肺稍微膨胀后立即回抽生理盐水，重复操作10次

性福尔马林中固定，用于石蜡包埋切片，其余肺叶先放入液氮罐速冻30分钟，再转移至-80℃冰箱冷冻保存。图1-4 大鼠肺组织2.4 石蜡包埋和切片（1）将上述大鼠肺组织放置于预先配备好的 10%福尔马林溶液中固定 2 小时后，转移至 4℃冰箱过夜，再放置于 70%乙醇溶液中。

【参考文献】：
期刊论文
[1]博来霉素不同给药方式致大鼠肺纤维化模型探讨[J]. 王鹤,张广平,侯红平,高云航,高双荣,马梦,张海静,张钟秀,陈腾飞,苏萍,宋玲,杨依霏,李江,叶祖光.  中国实验方剂学杂志. 2019(11)
[2]细胞自噬在肺纤维化中作用的研究进展[J]. 王妍妮,王昌明.  中国呼吸与危重监护杂志. 2016(04)
[3]去泛素化酶OTUD3通过稳定PTEN抑制癌症发生发展[J]. 李洪昌,张鹏飞,袁林,张令强.  中国细胞生物学学报. 2016(06)
[4]组蛋白去乙酰化酶及其抑制剂与特发性肺纤维化的研究进展[J]. 朱红兰,刘代顺.  实用医学杂志. 2015(03)
[5]两种小鼠肺纤维化造模方法的比较[J]. 刘珊,范桂香,袁育康,史霖,胜利,杨建业.  西安交通大学学报(医学版). 2004(03)



本文编号：3100807