RNA干扰沉默TREM-2对内毒素所致急性肺损伤小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响

发布时间：2021-04-09 12:07

　　背景急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是临床常见的呼吸系统危重症之一,感染是导致ALI的常见原因,也是该病的首位高危因素。革兰氏阴性杆菌是目前临床感染中主要的病原菌,易导致ALI,主要是由于其外膜上的脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）,又称内毒素（endotoxin）活化炎性细胞释放大量炎症因子所致,故LPS是介导ALI的重要启动子。肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage,AM）广泛分布于肺及气道上皮内,是呼吸道的免疫核心细胞,也是LPS的主要效应细胞。AM表面可表达多种识别病原体的受体,如Toll蛋白样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、髓样细胞表达的激发受体（triggering receptorsexpressed on myeloid cells,TREMs）、清道夫受体（scavenger receptors,SR）等,LPS通过与这些模式识别受体（pattern recognition receptors,PRRs）结合,启动跨膜及细胞内信号转导,是引起过度炎症反应及ALI的主要因素之一。研究... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：175 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

TREM家族与TLR的受体信号通路RNA干扰(RNAinte币rence，RNAi)是新近发展起来的一种封闭基因表达的有效方法，为基因治疗疾病开启了一扇希望之门

山西医科大学博士学位论文结果1重组质粒构建模式图(图1一l)Bam川位点正义序列LOOP环反义序列Hindm位点编码TRE际 2shRNA的DNA插入部位功 lfl.11..1.‘一么L.吵‘’”“‘’;。，ll.川:.ll’l\，了、·I一l、f一l一BI卜pGC:i一场/My犷o/GFP65491一p…图1一1重组质粒pTREM一 2shRNA结构示意图注:图中为pGCsi质粒结构图，全长6549bP，编码shRNA的DNA使用u6启动子进行转录，GFP为编码绿色荧光蛋白的基因，AmPicillin、Hygromycin分别为氮节青尽案杭性、潮霉素抗性基因。 2pGCsi质粒B别rnHI和 Hind111双酶切结果(图l一2)图1一2质粒双酶切后l%琼脂糖凝胶电泳图注:pGCsi质粒酶切前后比较左:线性化Pocsi质粒(用 BamHI+Hind111双酶切)，右:pGCsi质粒

山西医科大学博士学位论文3重组质粒的PCR鉴定结果(图1一3)将转化菌液进行PCR后电泳，对重组质粒进行鉴定筛选。结果显示其中有三个质粒为阳性重组质粒，它们与未插入干扰片段的空载体相比目的片断长达约65bP左右，与插入目的基因的片段长度相吻合，结果符合设计要求。图1一3重组质粒PCR电泳图注:从左至右依次为oLZ000恻 ALadderMarker:200obp，l000bp，750bp，s00bp

【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA干扰作用（RNAi）研究进展[J]. 陈忠斌,于乐成,王升启.  中国生物化学与分子生物学报. 2002(05)



本文编号：3127595