KGFR腺病毒表达载体的构建及其在LPS所致肺泡上皮细胞损伤修复中的应用

发布时间：2021-04-14 01:55

　　急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是伴有严重呼吸功能障碍的一个复杂多变的过程。治疗和减轻ALI对机体的损害,降低死亡率,一直是医学界研究的热点。目前在传统的ALI治疗基础之上,对ALI的基因治疗也取得了一些进展。适合于ALI基因治疗的目的基因分为抗氧化剂编码基因、抗炎基因、保护和维持肺泡上皮细胞和内皮细胞功能的基因、抑制ARDS纤维化增生的基因等几类。在这几类基因中,保护和维持肺泡上皮细胞和内皮细胞功能的基因,是对损伤的肺泡上皮细胞的修复起关键作用的基因,而修复损伤的肺泡上皮细胞又是ALI救治的重点之一。但由于在ALI发生时,肺泡上皮细胞不仅仅是单纯的结构功能损伤,还伴有严重的凋亡现象,因此,对肺泡上皮细胞在ALI时的修复涉及到细胞结构功能的修复和肺泡上皮细胞的再生。肺间质细胞对正常肺泡上皮细胞的组织形成和对ALI时上皮细胞损伤的修复都具有重要作用。许多由间质细胞产生的细胞因子都可作为调节上皮细胞增生和分化的信号分子,其中角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）是最重要的因子之一。KGF不仅是上皮细胞的丝裂原,也是促进肺泡上... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

-1一步法RT-PCR检测正常小鼠肺组织KGFR和KGF存在情况

第三军医大学硕士学位论文法 RT-PCR 检测 LPS 作用后小鼠肺组织和 A549 细胞的 KGFR 表达用小鼠肺和 A549 细胞后，小鼠肺组织于 3、24、48、72h，A54h 分别提取 mRNA 进行 RT-PCR 检测。发现 KGFR 表达随着 L降趋势，通过 Bio-Rad 凝胶成像软件进行半定量分析，以标）为统计指标，显示小鼠肺组织各实验组与对照组之间以及有显著差异（P<0.01）。A549 细胞除了 24h 组与对照组比较有，其余各组与对照组比较以及它们相互间比较都没有明显差异-2 和表 1-1）1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

40 cycles标准曲线制作[20]及荧光定量方法的 KGFR 进行 PCR 扩增，扩增产物经纯化后测依照拷贝数将此扩增产物稀释为 103、104、105、1浓度梯度为标准进行 FQ-PCR，PE5700 荧光定量。每一次循环，PE5700 荧光定量 PCR 仪计数一值并通过标准曲线计算出样本的拷贝数。理±s 表示，各组间比较采用计量资料的 t 检验。定 KGFR 标准曲线[20]小鼠肺组织进行RT-PCR获得正常KGFR的DNA 103、104、105、106四个浓度梯度作为四个标准对数作标准曲线图。（见图 1-3-1）

【参考文献】：
期刊论文
[1]用荧光定量PCR方法检测转染细胞中外源基因的拷贝数[J]. 李影,何蕴韶,程刚,李虎.  中山医科大学学报. 2001(01)



本文编号：3136425