DcR3干预肺纤维化动物模型及其转染人成纤维细胞的实验研究

发布时间：2021-04-26 09:29

　　肺纤维化的发病率呈逐年上升的趋势,至今无有效的药物能逆转肺纤维化的自然过程及其终末结局。本研究将通过大鼠肺纤维化模型,观察不同时期DcR3对大鼠模型炎症及肺纤维化程度的影响,探讨DcR3对肺泡巨噬细胞、外周血淋巴细胞以及人成纤维细胞的作用,从而揭示DcR3在间质性疾病发病机制中的作用,为治疗肺纤维化奠定基础。我们通过DcR3早期干预实验性大鼠肺纤维模型来观察DcR3对肺纤维化大鼠巨噬细胞和淋巴细胞的作用;通过转染成纤维细胞来观察DcR3对肺成纤维细胞增殖及合成胶原能力的影响。采用RT-PCR和ELISA检测炎症因子的表达、HE和Masson染色观察组织病理变化、羟脯氨酸测定判定肺纤维化程度、流式细胞术检测细胞的凋亡和淋巴细胞的活化、MTT检测细胞的增殖、Western blot检测胶原合成能力。结果发现DcR3干预组炎症因子表达明显减少,羟脯氨酸含量降低,肺泡炎症和肺纤维化程度明显减轻;DcR3干预组肺泡巨噬细胞增殖能力、分泌功能增强和外周血淋巴细胞增殖能力增强、活化细胞比例高;两种细胞的凋亡百分率明显降低;DcR3促进了肺成纤维细胞增殖及合成胶原能力,抑制了成纤维细胞的凋亡。说明Dc... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：99 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
提要
英文缩写词表
第1章 绪论
    1 肺纤维化的研究进展
    2 诱骗受体3（DcR3）的研究进展
    3 DcR3在肺纤维化疾病中的研究进展
    4 前期工作基础及本研究主旨
第2章 DcR3对肺纤维化大鼠模型的保护作用
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂及仪器
    2 实验方法
        2.1 动物的饲养与处死
        2.2 标本的处理
    3 实验结果
        3.1 大鼠一般状态的变化
        3.2 肺组织大体形态变化
        3.3 肺组织切片（HE染色和Masson三联染色）结果
        3.4 肺组织病理程度的变化
        3.5 不同实验组、不同时期BALF细胞计数的变化
        3.6 TNF-α、TGF-β mRNA表达量的变化
        3.7 BALF上清中TNF-α、TGF-β的含量检测
        3.8 肺组织羟脯氨酸含量测定
    4 讨论
第3章 DcR3对纤维化大鼠肺巨噬细胞和血淋巴细胞的作用
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂及仪器
    2 实验方法
        2.1 动物的饲养与处死
        2.2 淋巴细胞实验
        2.3 巨噬细胞实验
        2.4 结果处理及统计
    3 实验结果
        3.1 血淋巴细胞和肺泡巨噬细胞增殖能力检测结果
+淋巴细胞的检测">        3.2 CD69⁺淋巴细胞的检测
        3.3 巨噬细胞体外培养后TNF-α、TGF-β的检测结果
        3.4 外周血淋巴细胞和肺泡巨噬细胞凋亡百分率的检测
    4 讨论
第4章 DcR3转染人肺成纤维细胞的实验研究
    1 实验材料
    2 实验方法
        2.1 DcR3重组真核表达载体构建
        2.2 DcR3重组真核表达载体（pvax1-DcR3）转染人肺成纤维细胞（HLF）
        2.3 DcR3对HLF细胞增殖活性的影响
        2.4 DcR3对HLF细胞合成Col Ⅳ胶原的影响
        2.5 DcR3对HLF细胞凋亡百分率的影响
        2.6 结果处理及统计
    3 实验结果
        3.1 重组质粒pvax1-DcR3的双酶切鉴定
        3.2 pvax1-DcR3重组载体测序及序列分析结果
        3.3 转染后RT-PCR鉴定结果
        3.4 HLF增殖能力的检测结果
        3.5 DcR3对HLF合成Col Ⅳ的作用
        3.6 DcR3对HLF凋亡的影响
    4 讨论
结论
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果
致谢
中文摘要
Abstract


【参考文献】：
期刊论文
[1]DcR3对人肺成纤维细胞合成Ⅳ型胶原的作用[J]. 杨洋,乔俊华,安继红,张越,吴春风,郏博,马忠森.  细胞与分子免疫学杂志. 2008(10)
[2]抗人DcR3单克隆抗体的研制及其鉴定[J]. 吴春风,马忠森,王秀丽,杨俊玲,杨洋,张越,图们乌力吉,乔俊华.  细胞与分子免疫学杂志. 2008(02)
[3]Correlation between Expression of DcR3 on Tumor Cells and Sensitivity to FasL[J]. Wenzhu Li 1,2,3 ,Changgong Zhang 1,3 ,Caixia Chen 2 and Guohong Zhuang 1,1 Anti-Cancer Research Center,Medical College,Xiamen University,422 Siming South Road,Xiamen,Fujian 361005,China; 2School of Life Science,Xiamen University,422 Siming South Road, Xiamen,Fujian 361005,China; 3 These authors contributed equally to this work.  Cellular & Molecular Immunology. 2007(06)
[4]人DcR3融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备[J]. 吴春风,马忠森,王秀丽,杨俊玲,杨洋,张越,图们乌力吉,乔俊华.  细胞与分子免疫学杂志. 2007(12)
[5]Overexpression of decoy receptor 3 in hepatocellular carcinoma and its association with resistance to Fas ligand-mediated apoptosis[J]. Hong-Wei Shen, Shun-Liang Gao, Yu-Lian Wu, Shu-You Peng, Department of Surgery, 2nd Affiliated Hospital of Medical College, Zhejiang University,Hangzhou 310009, Zhejiang Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(38)
[6]特发性肺间质纤维化病人外周血单核细胞中DcR3基因表达的意义[J]. 王秀丽,尹金植,黄志卫,马忠森.  中国老年学杂志. 2004(12)



本文编号：3161175