蛋白激酶MK2调节巨噬细胞活化介导肺部炎症损伤的作用机制及药物干预

发布时间：2021-05-22 18:34

　　急性肺损伤（acute lung injury,ALI）和急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是严重的肺部疾病,主要病理表现为炎性细胞聚集、细胞因子释放增多及呼吸功能不全,部分病人因呼吸障碍而导致死亡。急性肺损伤病理机制复杂,其中巨噬细胞活化释放大量炎症因子,促进嗜中性粒细胞聚集,诱导内皮细胞和上皮细胞损伤,是ALI重要发病机制。因此,阐明巨噬细胞活化机制对于理解急性肺损伤的发病机理具有重要意义。急性肺损伤发病范围广、发病率和死亡率较高,临床缺乏有效治疗手段。因此,阐明急性肺损伤发病机制,鉴定有效药物靶标,开发潜在治疗药物对于治疗急性肺损伤至关重要。蛋白激酶MK2是p38 MAPK（mitogen-activated protein kinase）的重要下游蛋白激酶,参与调控细胞因子产生、转录因子活化及炎症受体表达,是调控炎症反应的关键分子。为探讨MK2是否调控急性肺损伤,我们利用MK2基因敲除(MK2^-/-)小鼠,构建败血症模型LPS（lipopolysaccharide）和CLP（cecal l... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
第一章 绪论
    1.1 急性肺损伤概述
    1.2 巨噬细胞与肺损伤
    1.3 蛋白激酶MK2 简介
    1.4 microRNA简介
    1.5 传统中药研究概述
    1.6 研究意义
第二章 MK2在急性肺损伤中的作用研究及其分子机制探讨
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验器材
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 巨噬细胞特异性MK2敲除(MK2_(Lyz2-KO))小鼠的建立
        2.2.2 动物模型的建立
        2.2.3 小鼠肺组织病理染色
        2.2.4 小鼠肺泡灌洗液(BALF)分离及总蛋白含量测定
        2.2.5 肺灌洗液中细胞计数
        2.2.6 流式细胞染色
        2.2.7 小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)含量检测
        2.2.8 小鼠肺组织干湿比检测
        2.2.9 酶联免疫吸附反应(ELISA)检测细胞因子表达
        2.2.10 蛋白提取及免疫印迹
        2.2.11 肺巨噬细胞分离
        2.2.12 小鼠骨髓来源巨噬细胞的分离培养
        2.2.13 细胞RNA提取、反转录及荧光定量PCR
        2.2.14 microRNA转染
        2.2.15 细胞复苏、传代及冻存
        2.2.16 质粒构建
        2.2.17 荧光素酶报告基因分析
        2.2.18 统计方法
    2.3 研究结果
        2.3.1 MK2 基因缺失降低败血症引起的死亡率
        2.3.2 MK2 基因缺失缓解败血症诱导的急性肺损伤
        2.3.3 髓系细胞特异性MK2 缺失缓解LPS诱导的急性肺损伤
        2.3.4 MK2 通过调控巨噬细胞功能调节急性炎症反应
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 原百部碱通过调控巨噬细胞功能缓解LPS诱导的急性肺损伤
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验器材
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验动物
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞复苏、传代及冻存
        3.2.2 骨髓来源巨噬细胞分离培养
        3.2.3 MTT实验
        3.2.4 NO含量检测
        3.2.5 细胞或组织RNA提取、反转录及荧光定量PCR
        3.2.6 LPS诱导急性肺损伤模型构建
        3.2.7 小鼠肺泡灌洗液分离
        3.2.8 髓过氧化物酶含量检测
        3.2.9 小鼠肺组织病理切片染色及评分
        3.2.10 小鼠肺灌洗液蛋白浓度测定
        3.2.11 酶联免疫吸附反应(ELISA)检测小鼠肺组织细胞因子含量
        3.2.12 蛋白提取及免疫印迹
        3.2.13 统计方法
    3.3 研究结果
        3.3.1 原百部碱下调LPS诱导的MK2 磷酸化
        3.3.2 原百部碱减弱LPS诱导的巨噬细胞MAPKs磷酸化和AKT的磷酸化
        3.3.3 原百部碱抑制LPS诱导的RAW264.7 和骨髓巨噬细胞内促炎介质的产生
        3.3.4 原百部碱缓解LPS诱导的急性肺损伤
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 原百部碱缓解DRA诱导的哮喘及其机制研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验器材
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验动物
    4.2 实验方法
        4.2.1 DRA诱导小鼠哮喘模型的构建
        4.2.2 小鼠肺泡灌洗液分离
        4.2.3 肺灌洗液中细胞计数
        4.2.4流式细胞染色实验
        4.2.5 肺灌洗液总蛋白浓度测定(BCA法)
        4.2.6 小鼠肺组织病理切片染色
        4.2.7 小鼠血清中总IgE含量检测
        4.2.8 小鼠组织RNA提取及荧光定量PCR
        4.2.9 小鼠骨髓巨噬细胞的分离培养
        4.2.10 蛋白提取及免疫印迹
        4.2.11 统计方法
    4.3 研究结果
        4.3.1 原百部碱缓解DRA诱导的哮喘
        4.3.2 原百部碱通过调控巨噬细胞极化介导哮喘
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 总结与展望
    5.1 创新点
    5.2 研究待解决问题
    5.3 应用前景
参考文献
致谢
博士期间发表的学术论文
基金资助


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3201479