HIPK2表达变化通过JNK通路对肺成纤维细胞及小鼠肺纤维化的影响

发布时间：2021-06-06 05:38

　　研究目的:1.明确同源结构域相互作用蛋白激酶2（HIPK2）在小鼠成纤维细胞凋亡过程中的作用及可能作用机制;2.明确外源调控HIPK2对JNK凋亡信号通路的影响,并初步探讨二者之间的可能调控机制。3.探究HIPK2过表达对博来霉素（Bleomycin,BLM）诱导的C57BL/6小鼠肺纤维化及JNK通路的影响。研究方法:购买含绿色荧光蛋白（Green Flurescence Protein,GFP）示踪基因的HIPK2腺病毒载体（Ad-HIPK2）和靶向HIPK2的特异性shRNA腺病毒载体（Ad-sh-HIPK2）。体外培养小鼠肺成纤维细胞（MLF）,并分为7组:（1）单纯腺病毒载体感染组:Ad-GFP组、Ad-HIPK2组、Ad-sh-control组和Ad-sh-HIPK2组;（2）加入JNK抑制剂SP60025后分组为Ad-GFP组、Ad-HIPK2组和Ad-HIPK2+SP600125组。随后用CCK8、流式细胞式及Transwell法检测增殖、凋亡及侵袭能力,RT-PCR检测各组细胞HIPK2、JNK、Daxx、Bax、Bc1-2、caspase3、CollaⅠ/Ⅲ、及α-... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Westernblot检测各组肺成纤维细胞HIPK2,JNK,Bax,Bcl-2,caspase3,CollaI,CollaIII,α-SMA蛋白表达

青岛大学硕士论文1431.000±0.000Ad-HIPK231.484±0.035-23.872#0.000Ad-sh-control31.000±0.000Ad-sh-HIPK230.523±0.03027.092*0.000HIPK2蛋白表达量以HIPK2蛋白条带亮度值与其对应的内参照（GAPDH）的亮度值的比值表示。#：与Ad-GFP组相比；*：与Ad-sh-control组相比。图3.1.1各组细胞HIPK2蛋白表达的柱状图。#：与Ad-control组相比，P<0.05；*：与Ad-sh-control组相比，P<0.05。3.1.2各组细胞JNK的蛋白表达水平与Ad-GFP组相比，Ad-HIPK2组JNK蛋白表达增加，差异有统计学意义（t=-66.446,P＜0.05）。与Ad-sh-control组相比，Ad-sh-HIPK2组JNK蛋白表达减少，差异有统计学意义（t=81.004,P＜0.05）。表3.1.2WB检测各组细胞中JNK蛋白的表达水平组别n（JNK/GAPDH，x±s）t值P值Ad-GFP31.000±0.000Ad-HIPK233.059±0.054-66.446#0.000Ad-sh-control31.000±0.000Ad-sh-HIPK230.519±0.01081.004*0.000JNK蛋白表达量以JNK蛋白条带亮度值与其对应的内参照（GAPDH）的亮度值的比值表示。#：与Ad-GFP组相比；*：与Ad-sh-control组相比。

实验结果15图3.1.2各组细胞JNK蛋白表达的柱状图。#：与Ad-control组相比，P<0.05；*：与Ad-sh-control组相比，P<0.05。3.1.3各组细胞Daxx的蛋白表达水平与Ad-GFP组相比，Ad-HIPK2组Daxx蛋白表达增加，差异有统计学意义（t=-35.216,P＜0.05）。与Ad-sh-control组相比，Ad-sh-HIPK2组Daxx蛋白表达减少，差异有统计学意义（t=44.752,P＜0.05）。表3.1.3WB检测各组细胞中Daxx蛋白的表达水平组别n（Daxx/GAPDH，x±s）t值P值Ad-GFP31.000±0.000Ad-HIPK233.440±0.012-35.216#0.000Ad-sh-control31.000±0.000Ad-sh-HIPK230.456±0.02144.752*0.000Daxx蛋白表达量以Daxx蛋白条带亮度值与其对应的内参照（GAPDH）的亮度值的比值表示。#：与Ad-GFP组相比；*：与Ad-sh-control组相比。


本文编号：3213723