Wnt经典通路对MSC细胞自噬的作用及机制研究

发布时间：2021-06-22 18:38

　　目的观察Wnt经典通路对ARDS时MSC向肺上皮细胞定向分化时细胞自噬的调节作用,并观察MSC的PTEN-PI3K/Akt/mTOR通路信号分子变化,明确Wnt经典通路对MSC向肺泡上皮细胞定向分化过程中细胞自噬调控的分子机制,为进一步提高MSC治疗ARDS的疗效提供实验基础。方法首先,用全骨髓细胞贴壁法进行MSC的培养和纯化,并通过观察形态（MSC呈梭形,类似于成纤维细胞）、用流式细胞仪检测其表面标志物（CD90[+]、CD29[+]、CD45[-]）和是否能诱导分化为脂肪细胞和骨细胞来鉴定是否为MSC。其次,将8¹0周的C57BL/c小鼠分为对照组和实验组,实验组通过气管注入5mg/Kg的LPS复ARDS模型,对照组气管注入等体积的NS,来建立ARDS小鼠模型。再将ARDS小鼠模型复制后1h将小鼠处死,提取肺细胞。然后,将悬挂式transwell小室,将小鼠肺细胞、小鼠骨髓MSC建立体外共培养实验模型。之后,将体外培养诱导MSC向肺上皮细胞定向分化模型进行以下分组和处理:a.空白组:MSC单独培养;b.对照组:MSC+正常肺细胞;c.损伤肺细胞组:MSC+LP... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Tranawell小室实物图

实验结果实验结果骨髓间充质干细胞的分离培养和鉴定结果观察代培养时，全骨髓贴壁法分离的骨髓细胞呈圆形，胞体透亮，大小不细胞等血系细胞相互混杂。72h 半量换液后可见大量贴壁细胞，6~7d 成不同大小、分散的细胞集落， 9~10d 细胞逐渐融合成片，相互紧密贴化传代至第 3 代，可见细胞呈均匀分布的纺锤形平均生，呈典型的漩涡1。

图 3.2 流式细胞仪鉴定 BMSCs 表面分子标志 Fig 3 BMSCs surface molecules identified by flowcytometry3.骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化能力鉴定①骨髓间充质干细胞的成骨分化能力鉴定大鼠骨髓间充质干细胞经骨向诱导后形态由原来的纺锤形逐渐转化为多角形、形等，较对照组细胞体积更大，细胞外基质分泌逐渐增多，胞外可见许多黑色细小粒(见图 3.3) 。骨向诱导 12d 后以改良钙钴法进行碱性磷酸酶染色，胞浆内呈现深棕或深黑色颗粒状或大片状黑色沉淀(见图 3.4)，同时碱性磷酸酶活力明显升高 (P<0.0见图 3.5)；骨向诱导 21d 后运用茜素红进行矿化结节染色，光镜下诱导组可见细胞合重叠生长，形成明显的红色致密结节，周围呈放射状突起，表明细胞形成矿化结节

【参考文献】：
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本文编号：3243344