COPD大鼠模型骨骼肌萎缩中Caspase-3、-8、-9蛋白酶表达的研究

发布时间：2021-07-01 11:50

　　目的:研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型骨骼肌萎缩中肌细胞凋亡的参与情况,并通过测定几种关键的Caspase蛋白酶的表达来推断可能的凋亡信号传导途径。方法:通过被动吸烟和气道注射猪胰弹性蛋白酶（PPE）建立COPD大鼠模型。从体重基本正常的COPD阳性大鼠中随机选取18只为COPD营养正常组（B组）,从体重明显较轻的COPD阳性大鼠中随机选取18只COPD营养不良组（C组）,另外选18只正常大鼠做为对照组进行研究。取三组大鼠的趾长伸肌和膈肌分别做成病理标本,用TdT介导的缺口末端标记（TUNEL）法和免疫组化法分别测定DNA碎片和评价Caspase-3、-8、-9在这些标本中的活性表达。结果:用TUNEL法和Caspase-3免疫组化法测得的COPD营养不良组大鼠模型骨骼肌细胞的凋亡率分别是53.9%和44.4%,两种检测方法有较好的一致性（r=0.923）;趾长伸肌重量是骨骼肌萎缩的一个稳定的指标,其与凋亡率呈明显的负相关（r=-0.89）;Caspase-8、-9仅在COPD营养不良组大鼠肌细胞中明显表达,在趾长伸肌中的Caspase-8的平均光密度（AOD）和积分光密度（I... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英汉缩略词对照表
第一章 前言
第二章 材料与方法
    2.1 主要试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要实验用溶液的配制
    2.2 研究对象
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 实验动物分组
        2.2.3 实验动物编号
        2.2.4 实验动物饲养
    2.3 实验方法
        2.3.1 大鼠COPD模型建立
        2.3.2 COPD模型组大鼠营养不良的判断
        2.3.3 模型组成模后分组
        2.3.4 实验动物的处死
        2.3.5 肺功能的测定
        2.3.6 病理标本的制备和保存
        2.3.7 标本的病理学检测
        2.3.8 骨骼肌细胞凋亡率测定
        2.3.9 骨骼肌细胞Caspase蛋白酶表达
        2.3.10 Caspase-3、-8、-9观察和分析
    2.4 统计学分析
第三章 结果
    1.模型评价
        1.1.大鼠一般情况
        1.2.大鼠肺组织、气道病理改变(见本章附图一)
        1.3.肺功能
        1.4 骨骼肌病理变化(见本章附图二)
    2.大鼠体重变化
    3.趾长伸肌重量变化
    4.骨骼肌凋亡率测定
        4.1 实验大鼠膈肌、趾长伸肌凋亡率
        4.2 平均凋亡率与体重相关性分析
        4.3 趾长伸肌凋亡率与趾长伸肌重量相关性分析
        4.4 膈肌凋亡率与趾长伸肌凋亡率的关系
    5.Caspase-3表达
        5.1 实验大鼠膈肌、趾长伸肌Caspase-3细胞核染色分析
        5.2 膈肌、趾长伸肌Caspase-3阳性细胞核比率相关性分析
        5.3 Caspase-3阳性细胞核比率与TUNEL检测的凋亡率相关性分析
    6.Caspase-8、-9表达
        6.1 一般结果
        6.2 膈肌与趾长伸肌切片Caspase-8免疫组化染色光密度对比分析
        6.3 膈肌与趾长伸肌切片Caspase-9免疫组化染色光密度对比分析
    附图一 实验大鼠肺组织病理学图片
    附图二 实验大鼠骨骼肌病理图片
    附图三 COPD营养不良组Caspase免疫组化图片
    附图四 实验大鼠骨骼肌凋亡图片
第五章 结论
参考文献
综述:骨骼肌萎缩中凋亡现象与机制
    1.细胞凋亡的途径
        1.1 死亡受体及配体介导的细胞凋亡的激活
        1.2 线粒体路径
        1.3 内质网途径
    2.骨骼肌细胞凋亡的研究
        2.1 废用引起的骨骼肌萎缩中的凋亡
        2.2 去神经支配骨骼肌萎缩中的凋亡
        2.3 引起骨骼肌凋亡的其它原因
    3.小结
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间主要研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤坏死因子α对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型呼吸肌蛋白质分解代谢的影响[J]. 孙圣华,唐文祥,刘纯,林桦,杨红辉.  中华结核和呼吸杂志. 2007(03)
[2]COPD营养不良与细胞因子的关系及消炎痛干预实验研究[J]. 赵亚丽,孙圣华,刘纯,周妍,唐文祥.  医学临床研究. 2006(10)
[3]肌萎缩时的蛋白质降解通路[J]. 孟思进,余龙江.  生命的化学. 2006(01)
[4]血清瘦素、肿瘤坏死因子-α与慢阻肺疾病患者营养不良的关系研究[J]. 杨红辉,孙圣华,刘纯,刘宗道,刘建明,丘万服.  中国医师杂志. 2004(01)
[5]COPD患者缺氧对TNF-α系统的激活及与营养不良的相关性[J]. 詹娟,孙圣华.  医学临床研究. 2003(12)
[6]慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道重塑及生长因子的研究[J]. 宋一平,崔德健,茅培英,梁延杰,王德文.  中华结核和呼吸杂志. 2001(05)



本文编号：3259082