MEF2C调控大鼠脊髓背根节感觉神经元细胞P物质和低分子量神经丝微管蛋白表达的研究
发布时间：2021-07-03 01:05
目的:建立一种切实可行的胚胎大鼠背根神经节神经元培养及纯化方法,研究MEF2C在背根神经节神经元细胞内表达对P物质和低分子量神经丝微管蛋白基因表达的影响以及MEF2C与气道高反应性发生间可能的关系。方法:利用显微解剖获取足够数量的胚胎大鼠背根神经节,通过胰蛋白酶+EDTA消化、交替使用NB培养基与加入了5-氟-2-脱氧尿嘧啶核苷酸/尿苷的抗有丝分裂NB培养基等方法在体外获得纯化的背根神经节神经元,采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法与DAPI染核的方法鉴定并测定神经元的纯度。分离培养背根神经节神经元细胞,然后暴露于不同浓度的NGF下24小时,最后用实时聚合酶链反应技术检测P物质与低分子量神经丝微管蛋白基因在背根神经节神经元细胞内的表达。通过化学转染方法将合成的3条siRNA-Mef2c分别转染PC12细胞,并用实时聚合酶链反应技术筛选转染效率最高的siRNA。采用化学转染方法干扰背根神经节神经元细胞内MEF2C的表达,在高浓度神经生长因子刺激背根神经节神经元细胞后采用实时聚合酶链反应技术检测干扰后背根神经节神经元细胞内P物质与低分子量神经丝微管蛋白基因的表达。结果:1、获得的背根神经节神经...
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
免疫细胞化学荧光显微镜下观翻x200地.DRGn胞体及突触被anti一NF200标记;e.DAPI
图3不同浓度NGF刺激下P物质及Nn的表达:A随培养基内NGF浓度的不同P物质表达的变化，B随培养基内NGF浓度的不同Nn表达的变化表1不同浓度NGF刺激下P物质与Nfl表达的变化GeneNFLP一Sllbname10ng/ml3Ong/mlIOOng/ml1.32士0.071.41士0.122.23士0.203.44士0.18ZOOng/ml2.93士0.103.61士0.133siRNA一MenC干扰实验3.1筛选干扰效率最高的siRNA一Me几c采用2一幽CT统计方法对3条干扰PC12细胞内MefZ。的效率进行半定量分析，结果发现合成的3条SIRNAsiRNA一Me几c一1、siRNA一MefZc一2和siRNA一MefZc一3对Me几c的干扰效率分别为0.04、0.54和0.66，同时我们检测相应siRNA一MefZc一3的脱靶效应，发现SIRNA一Me几c一3干扰过程中没有对Creb的表达形成明显的影
图4筛选干扰效率最高的siRNA一Menc:A3条不同siRNA一Men。干扰效率检浏结果BsiRNA一Me几c一3干扰PC12细胞内Creb的表达无变化3.2对DRG神经元原代细胞内Me几c干扰效率的检测采用2一△△CT统计方法对采用s1RNA一Me几c一3干扰后DRG神经元原代细胞内MefZc表达结果进行分析，发现NGF高浓度(loong/rn工)组神经元细胞内MefZc的表达较对照组下降50%(P<0.05)，免疫荧光实验没有检测到对Creb表达的影响。P物质与NFL在RNA水平的表达受到了干扰MEFZC的影响，分别较对照组下降41%(p<0.05)与61%(p<0.05)。在NGF低浓度(long/mL)组神经元细胞内MefZc的表达较对照组下降41%，P物质与NFL在RNA水平的表达受到了干扰MEFZC的影像，分别较对照组下降16%(P<0.05)与36%(P<0.05)。NGF10一创.LsiR人A~co.口rol、GFIO.侧.LsiRXA一、IefZe一3NGF100一留.L51只NA一eo一打。l
【参考文献】：
期刊论文
[1]神经生长因子对培养的大鼠背根神经节神经元P物质释放的调节作用（英文）[J]. 杨向东,刘真,刘花香,王丽红,马春红,李振中. Neuroscience Bulletin. 2007(04)
[2]Effects of respiratory syncytial virus infection on the airway neuronal plasticity and its relationship to the bronchial hyperresponsiveness in rats[J]. SHEN Xiao-yue, PAN Pin-hua, WU E-sheng and HU Cheng-ping Department of Respiratory Medicine, Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410008, China (Shen XY, Pan PH, Wu ES and Hu CP). Chinese Medical Journal. 2006(02)
本文编号：3261549
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
免疫细胞化学荧光显微镜下观翻x200地.DRGn胞体及突触被anti一NF200标记;e.DAPI
图3不同浓度NGF刺激下P物质及Nn的表达:A随培养基内NGF浓度的不同P物质表达的变化，B随培养基内NGF浓度的不同Nn表达的变化表1不同浓度NGF刺激下P物质与Nfl表达的变化GeneNFLP一Sllbname10ng/ml3Ong/mlIOOng/ml1.32士0.071.41士0.122.23士0.203.44士0.18ZOOng/ml2.93士0.103.61士0.133siRNA一MenC干扰实验3.1筛选干扰效率最高的siRNA一Me几c采用2一幽CT统计方法对3条干扰PC12细胞内MefZ。的效率进行半定量分析，结果发现合成的3条SIRNAsiRNA一Me几c一1、siRNA一MefZc一2和siRNA一MefZc一3对Me几c的干扰效率分别为0.04、0.54和0.66，同时我们检测相应siRNA一MefZc一3的脱靶效应，发现SIRNA一Me几c一3干扰过程中没有对Creb的表达形成明显的影
图4筛选干扰效率最高的siRNA一Menc:A3条不同siRNA一Men。干扰效率检浏结果BsiRNA一Me几c一3干扰PC12细胞内Creb的表达无变化3.2对DRG神经元原代细胞内Me几c干扰效率的检测采用2一△△CT统计方法对采用s1RNA一Me几c一3干扰后DRG神经元原代细胞内MefZc表达结果进行分析，发现NGF高浓度(loong/rn工)组神经元细胞内MefZc的表达较对照组下降50%(P<0.05)，免疫荧光实验没有检测到对Creb表达的影响。P物质与NFL在RNA水平的表达受到了干扰MEFZC的影响，分别较对照组下降41%(p<0.05)与61%(p<0.05)。在NGF低浓度(long/mL)组神经元细胞内MefZc的表达较对照组下降41%，P物质与NFL在RNA水平的表达受到了干扰MEFZC的影像，分别较对照组下降16%(P<0.05)与36%(P<0.05)。NGF10一创.LsiR人A~co.口rol、GFIO.侧.LsiRXA一、IefZe一3NGF100一留.L51只NA一eo一打。l
【参考文献】：
期刊论文
[1]神经生长因子对培养的大鼠背根神经节神经元P物质释放的调节作用（英文）[J]. 杨向东,刘真,刘花香,王丽红,马春红,李振中. Neuroscience Bulletin. 2007(04)
[2]Effects of respiratory syncytial virus infection on the airway neuronal plasticity and its relationship to the bronchial hyperresponsiveness in rats[J]. SHEN Xiao-yue, PAN Pin-hua, WU E-sheng and HU Cheng-ping Department of Respiratory Medicine, Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410008, China (Shen XY, Pan PH, Wu ES and Hu CP). Chinese Medical Journal. 2006(02)
本文编号：3261549
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