内皮祖细胞在烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病小鼠模型中的作用及机制
发布时间：2021-07-07 21:58
目的探讨内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells, EPCs）的培养及鉴定,比较密度梯度离心和全骨髓培养法分离培养EPCs的差异。方法取4周雄性近交系C57BL／6J小鼠骨髓,分别采用密度梯度离心及全骨髓培养法进行培养。相差倒置显微镜观察各组细胞贴壁情况和细胞形态；采用免疫荧光检测细胞摄取Dil-acLDL及结合FITC-UEA-I能力；采用免疫荧光检测细胞血管性血友病因子（vWF）表达,免疫细胞化学检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达及流式细胞术检测细胞表面标志CD34、CD133和Flk-1的表达。结果（1）全骨髓培养法培养贴壁细胞多数呈长梭形铺展生长,部分细胞呈类圆形及纺锤形；密度梯度离心培养细胞多呈类圆形、纺缍形、梭形或多边形,部分细胞呈线状排列,培养过程中可见典型铺路石样外观及形成血管样结构。（2）密度梯度离心培养摄取Dil-acLDL和结合FITC-UEA-I双阳性率较全骨髓培养法高[（95.3±1.8）%Vs.（59.7±8.6）%,P<0.05]。（3）密度梯度离心培养细胞vWF及eNOS表达阳性率均高于全骨髓培养法[（92.9±1....
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
全骨髓培养法细胞形态学观察(x200)
c:细胞结合Fl’fC一UEA一l，显示绿色 ;d:DAPI染核定位;c:荧光共聚焦，双染呈黄色或橙色;f:双染与OAPI染核图片重叠图1共两种培养方法的摄取Di卜aclJDL及结合Flrrc一陇A一I双染比较 (X200)a一d:全骨髓培养贴壁细胞双染鉴定;二h:密度梯度离心法贴壁细胞双染鉴定1.3.3免疫荧光法检测细胞vWF表达荧光显微镜卜，空白对照未见荧光显示(图l一sa)，vWF阳性细胞胞浆见绿色荧光表达(图1一sb)。个侣，髓培养法及密度梯度离心法培养第10d细胞vWF阳性表达率分别为(51.6士3.5)%、(92.叭1.5)%。密度梯度离心法第10d细胞vwF表达率高于个什髓培养法，差异有统计学意义(尸<0.05，表l一1)。
货位论文第1今培养法，差异有统计一学意义(尸<0.05，图l一4，表1一l)。图1一3密度梯度离心法培养细胞第10d摄取Di卜acLDL及结合FITC一U卜A一I双染(、400)注:a:普通光学显微镜;b:细月刨聂取Di卜acLDL，显示红色;c:细胞结合Fl’fC一UEA一l，显示绿色 ;d:DAPI染核定位;c:荧光共聚焦，双染呈黄色或橙色;f:双染与OAPI染核图片重叠图1共两种培养方法的摄取Di卜aclJDL及结合Flrrc一陇A一I双染比较 (X200)a一d:全骨髓培养贴壁细胞双染鉴定;二h:密度梯度离心法贴壁细胞双染鉴定1.3.3免疫荧光法检测细胞vWF表达荧光显微镜卜，空白对照未见荧光显示(图l一sa)，vWF阳性细胞胞浆见绿色荧光表达(图1一sb)。个侣，髓培养法及密度梯度离心法培养第10d细胞vWF阳性表达率分别为(51.6士3.5)%、(92.叭1.5)%。密度梯度离心法第10d细胞vwF表达率高于个什髓培养法，差异有统计学意义(尸<0.05
【参考文献】：
期刊论文
[1]全骨髓培养法和密度梯度离心法分离hBMSCs的比较研究[J]. 黄谦,吴涛,梁杰,杨科跃,金丹. 中国修复重建外科杂志. 2009(11)
[2]香烟暴露对大鼠肺组织及人血管内皮细胞MMP-9和TIMP-1表达的影响[J]. 吴杰,陈平,谢丽华,蔡珊,陈剑波,张程,刘绍坤. 中国医科大学学报. 2009(06)
[3]Passage of bone-marrow-derived liver stem cells in a proliferating culture system[J]. Yun-Feng Cai,Shu-Ying Su,Zuo-Jun Zhen,Huan-Wei Chen,Department of Hepatobiliary Surgery,the Affiliated Foshan Hospital of Sun Yat-sen University,Foshan 528000,Guangdong Province,China Ji-Sheng Chen,Department of Hepatobiliary Surgery,the Second Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangzhou 510120,Guangdong Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2009(13)
[4]骨髓间充质干细胞移植对木瓜蛋白酶和[60Co]照射所致大鼠肺气肿的作用[J]. 甄国华,刘红梅,张珍祥,张惠兰,顾乃兵,徐永健. 中国病理生理杂志. 2008(08)
[5]内皮祖细胞在炎症损伤修复中的作用和机制[J]. 黄河,汤耀卿. 生命科学. 2008(02)
[6]骨髓间充质干细胞移植对实验性肺气肿大鼠动脉血气及肺组织病理学变化的影响(英文)[J]. 李宝平,赵晓建,宋永明,张雷,路鹏雁. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(50)
[7]腺病毒介导MnSOD基因转染对香烟烟雾提取物致内皮细胞氧化损伤及凋亡的影响[J]. 曹蔚,陈平,蔡珊,张程,陈剑波,吴杰. 中国呼吸与危重监护杂志. 2007(06)
[8]烟雾暴露慢性阻塞性肺疾病大鼠肺内细胞凋亡和增殖的变化[J]. 陈剑波,陈平,蔡珊,张程,吴杰. 中华结核和呼吸杂志. 2007(09)
[9]成体干细胞与干细胞疾病[J]. 莫显明. 中国修复重建外科杂志. 2007(07)
[10]疾病状态下内皮祖细胞功能障碍机制与细胞移植[J]. 敖红,谭玉珍,王海杰. 国际心血管病杂志. 2007(01)
博士论文
[1]内皮祖细胞在慢性阻塞性肺疾病中的变化和作用[D]. 杨悦.中南大学 2010
[2]细胞色素C氧化酶Ⅱ亚基甲基化在慢性阻塞性肺疾病肺血管内皮细胞凋亡中的作用[D]. 杨敏.中南大学 2009
硕士论文
[1]前列环素在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达及其在香烟提取物诱导的内皮细胞凋亡中的保护作用[D]. 沈芹.中南大学 2009
本文编号：3270444
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
全骨髓培养法细胞形态学观察(x200)
c:细胞结合Fl’fC一UEA一l，显示绿色 ;d:DAPI染核定位;c:荧光共聚焦，双染呈黄色或橙色;f:双染与OAPI染核图片重叠图1共两种培养方法的摄取Di卜aclJDL及结合Flrrc一陇A一I双染比较 (X200)a一d:全骨髓培养贴壁细胞双染鉴定;二h:密度梯度离心法贴壁细胞双染鉴定1.3.3免疫荧光法检测细胞vWF表达荧光显微镜卜，空白对照未见荧光显示(图l一sa)，vWF阳性细胞胞浆见绿色荧光表达(图1一sb)。个侣，髓培养法及密度梯度离心法培养第10d细胞vWF阳性表达率分别为(51.6士3.5)%、(92.叭1.5)%。密度梯度离心法第10d细胞vwF表达率高于个什髓培养法，差异有统计学意义(尸<0.05，表l一1)。
货位论文第1今培养法，差异有统计一学意义(尸<0.05，图l一4，表1一l)。图1一3密度梯度离心法培养细胞第10d摄取Di卜acLDL及结合FITC一U卜A一I双染(、400)注:a:普通光学显微镜;b:细月刨聂取Di卜acLDL，显示红色;c:细胞结合Fl’fC一UEA一l，显示绿色 ;d:DAPI染核定位;c:荧光共聚焦，双染呈黄色或橙色;f:双染与OAPI染核图片重叠图1共两种培养方法的摄取Di卜aclJDL及结合Flrrc一陇A一I双染比较 (X200)a一d:全骨髓培养贴壁细胞双染鉴定;二h:密度梯度离心法贴壁细胞双染鉴定1.3.3免疫荧光法检测细胞vWF表达荧光显微镜卜，空白对照未见荧光显示(图l一sa)，vWF阳性细胞胞浆见绿色荧光表达(图1一sb)。个侣，髓培养法及密度梯度离心法培养第10d细胞vWF阳性表达率分别为(51.6士3.5)%、(92.叭1.5)%。密度梯度离心法第10d细胞vwF表达率高于个什髓培养法，差异有统计学意义(尸<0.05
【参考文献】：
期刊论文
[1]全骨髓培养法和密度梯度离心法分离hBMSCs的比较研究[J]. 黄谦,吴涛,梁杰,杨科跃,金丹. 中国修复重建外科杂志. 2009(11)
[2]香烟暴露对大鼠肺组织及人血管内皮细胞MMP-9和TIMP-1表达的影响[J]. 吴杰,陈平,谢丽华,蔡珊,陈剑波,张程,刘绍坤. 中国医科大学学报. 2009(06)
[3]Passage of bone-marrow-derived liver stem cells in a proliferating culture system[J]. Yun-Feng Cai,Shu-Ying Su,Zuo-Jun Zhen,Huan-Wei Chen,Department of Hepatobiliary Surgery,the Affiliated Foshan Hospital of Sun Yat-sen University,Foshan 528000,Guangdong Province,China Ji-Sheng Chen,Department of Hepatobiliary Surgery,the Second Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangzhou 510120,Guangdong Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2009(13)
[4]骨髓间充质干细胞移植对木瓜蛋白酶和[60Co]照射所致大鼠肺气肿的作用[J]. 甄国华,刘红梅,张珍祥,张惠兰,顾乃兵,徐永健. 中国病理生理杂志. 2008(08)
[5]内皮祖细胞在炎症损伤修复中的作用和机制[J]. 黄河,汤耀卿. 生命科学. 2008(02)
[6]骨髓间充质干细胞移植对实验性肺气肿大鼠动脉血气及肺组织病理学变化的影响(英文)[J]. 李宝平,赵晓建,宋永明,张雷,路鹏雁. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(50)
[7]腺病毒介导MnSOD基因转染对香烟烟雾提取物致内皮细胞氧化损伤及凋亡的影响[J]. 曹蔚,陈平,蔡珊,张程,陈剑波,吴杰. 中国呼吸与危重监护杂志. 2007(06)
[8]烟雾暴露慢性阻塞性肺疾病大鼠肺内细胞凋亡和增殖的变化[J]. 陈剑波,陈平,蔡珊,张程,吴杰. 中华结核和呼吸杂志. 2007(09)
[9]成体干细胞与干细胞疾病[J]. 莫显明. 中国修复重建外科杂志. 2007(07)
[10]疾病状态下内皮祖细胞功能障碍机制与细胞移植[J]. 敖红,谭玉珍,王海杰. 国际心血管病杂志. 2007(01)
博士论文
[1]内皮祖细胞在慢性阻塞性肺疾病中的变化和作用[D]. 杨悦.中南大学 2010
[2]细胞色素C氧化酶Ⅱ亚基甲基化在慢性阻塞性肺疾病肺血管内皮细胞凋亡中的作用[D]. 杨敏.中南大学 2009
硕士论文
[1]前列环素在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达及其在香烟提取物诱导的内皮细胞凋亡中的保护作用[D]. 沈芹.中南大学 2009
本文编号：3270444
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/huxijib/3270444.html
最近更新
教材专著
