SiO2粉尘诱导的成纤维细胞转分化过程线粒体代谢观察

发布时间：2021-07-08 03:53

　　背景和目的矽肺是由于长期吸入游离二氧化硅（SiO2）粉尘导致的肺组织广泛纤维化,其发生发展是多种细胞、细胞器以及分子共同参与的复杂过程,其中肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化是重要的环节。一般认为,细胞转分化过程中需要消耗能量以满足细胞合成、分泌相关蛋白,而能量的产生则需要线粒体代谢的参与。以往研究证明,在特发性肺纤维化（IPF）、慢性阻塞性肺疾病（COPD）、肺癌等肺部疾病中,均有线粒体形态、功能的变化和影响,但其在矽肺纤维化过程中的状态及作用尚不明确。因此,通过体外构建SiO2粉尘诱导肺成纤维细胞转分化模型,应用激光共聚焦显微镜、Western blot、实时荧光定量PCR等技术,观察转分化过程中线粒体功能改变,探索其潜在关联性,为深入了解矽肺发病过程中线粒体的调控作用,进一步阐明矽肺发病机制提供新的思路和参考依据。材料和方法1.材料人胚肺成纤维细胞（MRC-5）和人单核细胞（THP-1）购自中国科学院细胞库。2.方法采用佛波酯（PMA）诱导人单核细胞（THP-1细胞）分化为巨噬细胞,CCK-8实验确定SiO2粉尘染毒浓度。采用qPCR检测不同浓度TGF-β刺激人胚肺成纤维细胞（MR... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３．?１?ＰＭＡ刺激ＴＨＰ－１后ＣＤ６８的表达情况??注：蓝色为细胞核，红色为ＣＤ６８标记??

?２５０?３４．２９±〇．〇２ａ?３３．３９±０．０１ａｂ?３２．０３±１．０３ａｂｃ??Ｆ?９０．９１１?２６３．０４７?３６４．８７６??尸?＜０．００１?＜０？００］?＜０．００１??注：与同时间点〇Ｈｇ／ｍｌ比较，ａＰ＜０．０５；与同组２４ｈ相比，咿＜０．０５；与同组４８ｈ相比，９＜０．０５。??１５０－１??＋?２４ｈ存活率??４８ｈ存活率??一?７２ｈ存活率??０?５０?１００?１５０?２００?２５０?３００??二氧化硅浓度（ｎｇ／ｍｌ）??图３．２Ｓｉ０２刺激ＴＨＰ－１诱导巨噬细胞的存活率（１±又ｎ＝６，?％）??３．１．３ＴＧＦ－Ｐ染毒浓度的确定??采用不同的浓度ＴＧＦ－ｐ?（０－１０ｎｇ／ｍｌ）刺激ＭＲＣ－５细胞，分别在２４ｈ、４８ｈ、??７２ｈ时收集细胞，检测ａ－ＳＭ４、ｒＣＭ见见出、厂奶、ＣＯＺＪ、ＣｒＧＦ、ＣＯＺＪ??的ｍＲＮＡ表达水平，结果见表３．２至表３．８和图３．３。２．５?ｎｇ／ｍｌ、５?ｎｇ／ｍｌ、１０?ｎｇ／ｍｌ??均能使ＭＲＣ－５转分化指标升高，５?ｎｇ／ｍｌ效果优于２．５?ｎｇ／ｍｌ，又可满足实验需求。??最终选择５ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－卩浓度进行后续实验。??１９??

／ｍｌ??Ｉ４．?＊ｊ；?ｉｌｊｊｉ?卜?ｊ?Ｉ＊??Ｉ?？?ａ＾ＲＩＴＩ?ａｌｉｆｌ?ａｌ?ｌ?Ｉ?？?ｉｉｇｌｌｆｌ?ｉｉｆｌ?＾Ｉ?ｉ??２４ｈ?４８ｈ?７２ｈ?２４ｈ?４８ｈ?７２ｈ??ＣＯＬ１?ＣＴＧＦ??１０－．?一??§?Ｏｎｇ／ｍｌ??ｇ?８－?＊?Ｃ３?２．５ｎｇ／ｎｉ??§．?｜?Ｓ?６ｎｇ／ｍｌ??Ｓ?？＂?１?ｆＴＴＴｌ?１?〇ｎｇ／ｍｌ??ｇ?＊?Ｅ??ｉ?：Ｌ＿?ｊ??２４ｈ?４８ｈ?７２ｈ??ＣＯＬ３??图３．?３?ＴＧＦ－（３刺激ＭＲＣ－５转分化相关基因的表达??注：＊与各对照组相比Ｐ＜〇．〇５??３．１．４共培养模型中ＭＲＣ－５细胞的形态变化??图３．４共培养模型中＼１１＾：－５细胞的形态（＞＜２００）??２２??

【参考文献】：
期刊论文
[1]Oxidative stress as a crucial factor in liver diseases[J]. Halina Cichoz-Lach,Agata Michalak.  World Journal of Gastroenterology. 2014(25)



本文编号：3270803