香烟烟雾致RLE-6TN细胞损伤中线粒体自噬水平的变化及机制

发布时间：2021-07-11 17:15

　　研究目的:本实验研究香烟烟雾提取物（Cigarette Smoke Extract,CSE）是否能诱导RLE-6TN细胞发生线粒体自噬,并进行了相关机制的初步探讨,为慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）的治疗提供新的思路。研究方法:1.MTT比色法测定香烟烟雾提取物（Cigarette Smoke Extract,CSE）对RLE-6TN细胞生长的抑制作用,确定CSE的最适刺激时间和浓度。2.透射电镜检测RLE-6TN细胞在CSE刺激下的线粒体形态变化。3.流式细胞术或多功能酶标仪定量检测方法检测RLE-6TN细胞线粒体膜电位（Mitochondrial Membrane Potential,MMP）、细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）水平、线粒体内ROS水平及ATP的变化。4.Western blotting方法和免疫组织化学法检测LC3B、P62的表达水平。5.Western blotting方法检测细胞总蛋白和线粒体/胞浆蛋白中PINK1、Parkin、Drp1及Mfn2的表达... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CSE处理RLE-6TN细胞后的生长抑制率（%）*P﹤0.05，***P﹤0.001Fig.1GrowthinhibitionrateofcellstreatedwithCSEatdifferenttimesanddifferent

14图 2 透射电镜检测线粒体损伤情况Fig.2 Transmission electron microscopy was used to detect mitochondrial damage.透射电镜检测线粒体损伤情况：A. Control 组（×10000），B. Control 组（×20000），C. 5%CSE 组（×10000），D. 5%CSE 组（×20000）。2.2 CSE 诱导的 RLE-6TN 细胞线粒体膜电位（MMP）变化使用不同浓度的 CSE 刺激 RLE-6TN 细胞后，用罗丹明 123 探针进行孵育，Flexstation 3 多功能酶标仪定量检测发现，与 Control 组相比，CSE 组平均荧光强度占比（%）显著降低，且呈剂量依赖关系（P﹤0.05）（图-3B）。选取浓度为5%CSE 处理细胞，流式细胞仪检测显示，CSE 组平均荧光强度占比（%）显著降低（P﹤0.05）（图-3A）。

图 3 罗丹明 123 染料检测细胞 MMP 变化Fig.3 The changes of intracellular mitochondrial membrane potential(MMP) were detected byRhodamine 123. *P﹤0.05，**P﹤0.01，***P ﹤0.001.流式细胞术检测 RLE-6TN 细胞内 MMP 变化（A），a：Control 组，b：5%CSE 组，c：CCCP 组，d：与 Control 组比较，*P﹤0.05；多功能酶标仪定量检测 MMP 变化（B），与Control 组比较，**P﹤0.01，***P﹤0.001。2.3 CSE 诱导的 RLE-6TN 细胞活性氧变化（1）CSE 诱导的 RLE-6TN 细胞内 ROS 变化使用 5%CSE 刺激细胞，用 DCFH-DA 探针对 RLE-6TN 细胞进行孵育，Flexstation 3 多功能酶标仪检测发现，与 Control 组相比，CSE 组平均荧光强度占比（%）显著增高（P﹤0.05）（图 4-A）。由此可见，在 CSE 刺激下，RLE-6TN细胞内 ROS 水平升高。


本文编号：3278513