Rho/ROCK信号通路在矽尘诱导的人支气管上皮细胞上皮—间质转型中的作用机制研究

发布时间：2021-07-28 20:50

　　目的:以人支气管上皮细胞株HBE为研究体系,探讨矽尘是否能在体外诱导人支气管上皮细胞（HBE）发生上皮-间质转型（EMT）以及Rho/ROCK信号通路在矽尘诱导HBE细胞发生上皮-间质转型中的作用机制。方法:（1）倒置显微镜观察矽尘处理后HBE细胞形态学改变;（2）免疫细胞化学SP法（Immunocytochemical s-p method）及WesternBlot检测不同浓度矽尘（0μg/ml,50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml,300μg/ml）处理后HBE细胞72h后上皮细胞标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin,E-cad）和间质细胞标志物波形蛋白（Vimentin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的改变;（3）体外划痕实验检测矽尘处理后HBE细胞迁移能力变化;（4）使用Rho活性检测试剂盒行GSTPull-down检测矽尘处理HBE细胞不同时间点（0h,1h,2h,6h,12h,24h）Rho活性改变;（5）免疫细胞化学SP法及Western Blot检测经不同浓度Rho/ROCK信号通路特异性抑制剂Y-27632（10μM,20μM,30μM）预处... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

5102对HBE细胞Vimentin表达的影响(SP，x200)

硕士学位论文第三章实验结果3.25102诱导HBE细胞Rho活性变化为检测5102对HBE细胞Rho活性的影响，我们用5102(200pg/ml)刺激HBE细胞，并在不同时间点(分别为O、lh、Zh、6h、12h、24h)检测Rho活性。如图9所示，Rho活性变化呈时间依赖性，与对照组相比，5102在Zh内即可诱导Rho活化，为oh组的(3.09士0.30)倍(P(0.05)，至6h达到峰值，为对照组的(7.36士1.08)倍(P<0.05)，之后Rho活性逐渐降低，但仍高于Oh组(P(0.05)。

硕士学位论文第三章实验结果3.3Y一27632对5102诱导HBE细胞EMT的影响3.3.1E--cadhe:in的表达免疫细胞化学结果显示Y一27632(30pM)+5102(200pg/ml)组的HBE细胞与5102(200pg/ml)组相比E一ead表达水平上调(图10，P<0.05)。Westernblot结果显示，Y一27632(10pM)+5102(200pg/ml)组与510。(200以g/ml)处理组相比，E一cad蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05);但随着Y一27632浓度增高，E一Cad蛋白表达水平上调，Y一27632(20，M)+5102(200只g/ml)组、Y一27632(30，M)+5102(200pg/ml)组的E一Cad蛋白表达水平分别为5102(200pg/ml)处理组的(1.98士0.38)倍和(2.17士0.51)倍(图11，P(0.05)。20、30pM的Y一27632预处理后可抑制5102诱导的E一cad蛋白表达下调。

【参考文献】：
期刊论文
[1]转化生长因子β1对肝星状细胞迁移及细胞内Rho三磷酸鸟苷酶表达的影响[J]. 李蕾,蒋炜,王吉耀,杨长青,王逸青.  中华消化杂志. 2006(08)
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[3]从基因组学到蛋白质组学:科学的推动力[J]. 晏群,刘文恩,唐银.  医学与哲学. 2003(02)
[4]人类基因组计划成果的启示——还原论还是系统论[J]. 王世伟,赵杰,张万琴.  医学与哲学. 2001(09)



本文编号：3308623