RNA干扰沉默肺泡巨噬细胞MD-2对脂多糖所致大鼠急性肺损伤的影响
发布时间：2021-07-30 07:56
RNA干扰沉默肺泡巨噬细胞MD-2对脂多糖所致大鼠急性肺损伤的影响背景和目的急性肺损伤（acute lung injury, ALI）的发病机制复杂,但多种细胞因子和炎症介质以及效应细胞共同参与的、过度失控的炎症反应是发病的关键环节。由于炎症反应的环节众多、过程复杂,难以选择有效的靶点,故缺乏有效的抗炎治疗方法,ALI的病死率仍相当高。致病因子参与的炎症反应的上游环节则简单得多,可能会成为防治过度炎症反应的靶点。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是革兰阴性杆菌的主要致病成分,是导致ALI的重要致病因素。LPS由Toll样受体4（Toll like receptor 4, TLR4）及髓样分化蛋白-2（myeloid differentiation protein 2, MD-2）组成的复合受体介导跨膜信号转导,并通过激活效应细胞内的一系列下游信号分子,引起细胞因子和炎症介质的大量释放。MD-2在识别LPS和辅助TLR4将LPS信号转入细胞内的过程中起到核心作用。本研究探讨MD-2在LPS所致大鼠ALI中的作用,以及RNA干扰沉默肺泡巨噬细胞MD-2基因对LPS/TL...
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
LPS信号转导途径示意图
界刺激反应减弱，部分大鼠口鼻有红色泡沫样液体溢出。LPS组大鼠的肺组织W心为5.59士0.25，对照组大鼠的肺组织W心为4.23士0.19，前者显著增高(t=9.607，P<0.ol)。图1一l划兰\O将磁黔洲咬渗-KLPS组对照组图1一1、大鼠肺组织湿/干比值注:*与对照组比较，P<0.ol，n=5二、肺组织病理形态学改变1、大体观察:对照组大鼠肺脏外观色泽粉红，表面未见损伤病灶，包膜光滑，弹性好，切面干净;LPS组大鼠肺脏体积增大，色泽暗红，可见包膜下点、片状癖血和出血点，脏层胸膜张力较高，切面疏松湿润，有淡红色液体溢出。2、光镜下观察:肺组织石蜡切片HE染色显示，对照组大鼠肺组织结构完整，肺泡腔清晰，腔内无渗液，肺泡壁光滑，肺泡和肺间质无炎症细胞浸润(照片1一IA、ZA、3A)。
对提取的细胞总RNA经紫外分光光度计测定 A260/A280为 1.8一2.0，经琼脂糖凝胶电泳后可见285和 185区带，说明所提取的RNA纯度高，完整性好。图1一2图1一2、细胞总RNA电泳图2)半定量Rl’ -PCR检测MD一 2mRNA表达:半定量Rl’ -pcR结果显示MD一2基因的扩增产物为 133bp(内参p一actin基因扩增产物为4O0bp)处唯一的扩增条带，说明目的基因PcR产物特异性良好。图1一3
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用荧光共振能量转移技术研究活细胞TLR4与MD-2作用结构域[J]. 钟田雨,唐靖,陈登宇,刘亚伟,王蔚,刘靖华,姜勇. 生物化学与生物物理进展. 2009(11)
[2]TLR4信号通路与炎性反应[J]. 陈洁,姜虹. 医学综述. 2009(19)
[3]吸入一氧化氮对脂多糖所致大鼠急性肺损伤环氧合酶-2及TOLL样受体4表达的影响[J]. 吴妍雯,白明,张建初. 华中科技大学学报(医学版). 2009(03)
[4]脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖与内毒素血症小鼠肺泡巨噬细胞结合的影响[J]. 吴学玲,赵云峰,钱桂生,徐德彬,陈维中. 中国呼吸与危重监护杂志. 2008(03)
[5]MD2在内毒素激活肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达及作用[J]. 李永旺,张德明,钱桂生,毛宝龄. 重庆医学. 2007(16)
[6]LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌[J]. 张方,李子玲,施毅,赵明,辛晓峰,钱桂生. 中国病理生理杂志. 2007(07)
[7]RNA干扰技术抑制BAG-1在大鼠肺泡巨噬细胞表达及恢复GR抗炎效应的研究[J]. 张方,施毅,李子玲,钱桂生,罗向东,赵明,宋勇. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2007(03)
[8]全长hlrp分子在多种细胞系中的表达及其分析[J]. 毕媛,骆文静,侯立朝,蔡同建,陈耀明,刘明朝,陈景元,杜可军. 细胞与分子免疫学杂志. 2007(05)
[9]人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J]. 宋庆贺,柴玉波,陈苏民,陈南春,黄勇,代忠明. 第四军医大学学报. 2006(05)
[10]脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化和意义[J]. 杜晓辉,李荣,徐迎新,姚咏明,申传安,尹会男. 中华实验外科杂志. 2006(03)
本文编号：3311025
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
LPS信号转导途径示意图
界刺激反应减弱，部分大鼠口鼻有红色泡沫样液体溢出。LPS组大鼠的肺组织W心为5.59士0.25，对照组大鼠的肺组织W心为4.23士0.19，前者显著增高(t=9.607，P<0.ol)。图1一l划兰\O将磁黔洲咬渗-KLPS组对照组图1一1、大鼠肺组织湿/干比值注:*与对照组比较，P<0.ol，n=5二、肺组织病理形态学改变1、大体观察:对照组大鼠肺脏外观色泽粉红，表面未见损伤病灶，包膜光滑，弹性好，切面干净;LPS组大鼠肺脏体积增大，色泽暗红，可见包膜下点、片状癖血和出血点，脏层胸膜张力较高，切面疏松湿润，有淡红色液体溢出。2、光镜下观察:肺组织石蜡切片HE染色显示，对照组大鼠肺组织结构完整，肺泡腔清晰，腔内无渗液，肺泡壁光滑，肺泡和肺间质无炎症细胞浸润(照片1一IA、ZA、3A)。
对提取的细胞总RNA经紫外分光光度计测定 A260/A280为 1.8一2.0，经琼脂糖凝胶电泳后可见285和 185区带，说明所提取的RNA纯度高，完整性好。图1一2图1一2、细胞总RNA电泳图2)半定量Rl’ -PCR检测MD一 2mRNA表达:半定量Rl’ -pcR结果显示MD一2基因的扩增产物为 133bp(内参p一actin基因扩增产物为4O0bp)处唯一的扩增条带，说明目的基因PcR产物特异性良好。图1一3
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用荧光共振能量转移技术研究活细胞TLR4与MD-2作用结构域[J]. 钟田雨,唐靖,陈登宇,刘亚伟,王蔚,刘靖华,姜勇. 生物化学与生物物理进展. 2009(11)
[2]TLR4信号通路与炎性反应[J]. 陈洁,姜虹. 医学综述. 2009(19)
[3]吸入一氧化氮对脂多糖所致大鼠急性肺损伤环氧合酶-2及TOLL样受体4表达的影响[J]. 吴妍雯,白明,张建初. 华中科技大学学报(医学版). 2009(03)
[4]脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖与内毒素血症小鼠肺泡巨噬细胞结合的影响[J]. 吴学玲,赵云峰,钱桂生,徐德彬,陈维中. 中国呼吸与危重监护杂志. 2008(03)
[5]MD2在内毒素激活肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达及作用[J]. 李永旺,张德明,钱桂生,毛宝龄. 重庆医学. 2007(16)
[6]LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌[J]. 张方,李子玲,施毅,赵明,辛晓峰,钱桂生. 中国病理生理杂志. 2007(07)
[7]RNA干扰技术抑制BAG-1在大鼠肺泡巨噬细胞表达及恢复GR抗炎效应的研究[J]. 张方,施毅,李子玲,钱桂生,罗向东,赵明,宋勇. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2007(03)
[8]全长hlrp分子在多种细胞系中的表达及其分析[J]. 毕媛,骆文静,侯立朝,蔡同建,陈耀明,刘明朝,陈景元,杜可军. 细胞与分子免疫学杂志. 2007(05)
[9]人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J]. 宋庆贺,柴玉波,陈苏民,陈南春,黄勇,代忠明. 第四军医大学学报. 2006(05)
[10]脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化和意义[J]. 杜晓辉,李荣,徐迎新,姚咏明,申传安,尹会男. 中华实验外科杂志. 2006(03)
本文编号：3311025
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