Fasudi1对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用

发布时间：2017-04-28 05:08

  本文关键词：Fasudi1对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：急性肺损伤(acute lung injury, ALI)／急性呼吸窘迫综合症(acute respiratory distress syndrome, ARDS)是一系列损伤因素如创伤、微生物感染、误吸及药物等所致的临床危重症,发病率及死亡率极高,目前治疗手段有限,预后极差。级联放大、失控的炎症反应是发病的中心环节,贯穿病程始终。研究证实Rho激酶可能是炎症调控通路中的重要激酶之一。由于感染性致病因素是ALI/ARDS最常见的病因之一,本研究通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)建立小鼠败血症性ALI模型,探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)对LPS诱导的小鼠ALl的保护作用及其可能的机制。 方法：将C57BL/6小鼠按照随机对照原则分为4组,即对照(control)组、LPS (30mg/kg)组、fasudil (10mg/kg)+LPS组、地塞米松(dexamethasone, Dex;5mg/kg)+LPS组。造模后统计各组不同时间点的生存率,通过分析生存曲线,评估fasudil对LPS导致的小鼠ALI的保护作用。其余小鼠于造模后6h处死,收集小鼠血清、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)及肺组织标本。称量肺组织湿重及干重,计算肺组织湿干重比(wet dry ratio, W/D)评估肺水肿程度；苏木素-伊红(haematoxylineosin, HE)染色观察肺组织切片中炎症细胞浸润及组织损伤情况；检测BALF中细胞数量及蛋白浓度反映肺部炎细胞及组织渗出程度变化；酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELIS A)法测定肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)含量评价肺组织中性粒细胞浸润情况；ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor, TNF-α)、白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-10含量评价系统炎症反应水平；蛋白质印迹法(western blot)分析各组肺组织中B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2, bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bcl-2associated x protein,bax)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteine aspartic specific proteases,caspase)-3蛋白的表达以评估肺实质细胞凋亡情况。 结果：1、LPS30mg/kg腹腔注射可诱导小鼠发生败血症ALI、死亡率显著增加,fasudil和Dex可显著改善ALl小鼠生存率、延长生存时间；2、LPS组W/D比值(5.10±0.61)较control组(4.01±0.41)显著升高(P0.05),LPS+fasudil组(4.32±0.32)和LPS+Dex(4.27±0.33)组较LPS组显著降低(P0.05)；3、HE染色观察肺组织病理学变化,control组肺泡结构完整、肺泡壁仅有少许炎症细胞,肺组织无出血、水肿改变,评分为10.83±0.87,LPS组小鼠肺泡结构紊乱,肺组织出血、水肿,存在炎细胞浸润、肺泡壁增厚等现象,评分为10.83+0.87,显著高于control组(P0.05)。LPS+fasudil组及LPS+Dex组肺组织病理学损伤评分分别为7.33+0.88和6.67±1.11,较LPS组显著降低(P0.05)；4、LPS组BALF中细胞总数和中性粒细胞数分别为(17.92±2.99)×106/ml和(10.33±2.49)×106/ml,较control组(4.08±1.08)×106/ml和(1.92±0.66)×106/ml升高(P0.05),LPS+fasudil组、LPS+Dex组细胞总数分别为(14.17±2.21)×106/ml和(12.33±2.77)×106/ml,中性粒细胞数分别为(7.08±0.99)×106/ml和(5.08±1.93)×106/ml,均较LPS组降低(P0.05)。LPS组BALF中蛋白含量为(1032±207.2)μg/ml,较control组[(295.5±78.65)μg/m1]显著升高(P0.05),LPS+fasudil组、LPS+Dex组BALF中蛋白含量分别为(563.3±96.60)μg/ml和(495.2±1469)μg/ml,较LPS组显著下降(P0.05)；5、LPS组(3.46±0.62)小鼠肺组织MPO的含量显著高于control组(1.07±0.44)(P0.05),LPS+fasudil组(2.42+0.70)和LPS+Dex组(2.19±0.40)MPO含量均较LPS组显著降低(P0.05)；6、LPS组血清中TNF-α、IL-1p水平分别为(614.8±30.85) pg/ml、(88.45±7.47) pg/ml,均显著高于control组[分别为(19.19±2.80) pg/ml、(23.02±3.39) pg/ml](P0.05); LPS+fasudil组、 LPS+Dex组TNF-α分别为(377.1±33.68)pg/ml和(39.08±5.723)pg/ml,IL-1β分别为(56.76+5.62)pg/ml和(47.14+3.70)pg/ml,较LPS组均显著降低(P0.05)。LPS组血清中IL-10水平为(117.7+36.26)pg/ml,较control组[(16.734±3.66)pg/ml]显著升高(P0.05), LPS+fasudil组、LPS+Dex组IL-10水平分别为(248.3±56.10)pg/ml和(311.6±51.5)pg/ml,较LPS组显著升高(P0.05)；7、LPS组bax、cleaved caspase-3表达显著高于control组(P0.05),LPS+fasudil组和LPS+Dex组较LPS组表达显著降低(P0.05)。而bcl-2在fasudil组表达较LPS组升高(P0.05),LPS组bcl-2/bax较control组显著降低(P0.05),LPS+fasudil组及LPS+Dex组较LPS组升高(P0.05)。 结论：Fasudil预保护可显著减轻LPS诱导的小鼠ALI,改善小鼠的一般状态及生存率,其保护作用可能通过缓解小鼠肺水肿和肺部炎症细胞浸润,平衡促炎和抗炎细胞因子的表达,减轻全身炎症反应,抑制组织细胞凋亡实现。
【关键词】：法舒地尔 急性肺损伤 TNF-α IL-1β IL-10 凋亡
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.8
【目录】：

• 中英文对照表5-7
• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-18
• 材料和方法18-31
• 结果31-40
• 讨论40-44
• 结论44-45
• 参考文献45-51
• 附录 文献综述51-70
• 参考文献62-70
• 攻读学位期间发表论文情况70-71
• 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Min-Fu Tsan;;Heat Shock Protein and Innate Immunity[J];Cellular & Molecular Immunology;2004年04期

  本文关键词：Fasudi1对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：332159