流感病毒激活TLR7/NF-κB调控COPD急性加重气道炎症机制研究

发布时间：2021-08-28 23:13

　　目的:探讨流感病毒（influenza A virus,IAV）激活TLR7/NF-κB信号通路调控COPD急性加重气道炎症反应的分子机制,为临床寻找治疗IAV感染诱导AECOPD提供新靶点和理论依据。方法:从手术标本中获取正常和COPD患者气管组织,进行分离、纯化、鉴定、培养人原代气道上皮细胞（Normal/Disease Human bronchial epithelial cells,NHBE/DHBE）。实验分为6组,正常气道上皮细胞组（NHBE组/A组）、正常气道上皮细胞+A型流感病毒（IAV）组（NHBE+IAV/B组组）、COPD气道上皮细胞组（COPD/C组）、COPD气道上皮细胞+IAV组（COPD+IAV/D组）、正常气道上皮细胞+TLR7小干扰RNA组（NHBE+TLR7 si RNA/E组）、COPD气道上皮细胞+TLR7小干扰RNA组（COPD+TLR7 si RNA/F组）,分别与IAV、TLR7小干扰RNA共培养24h后,免疫印迹（Western blot）法检测气道上皮细胞TLR7、NF-κB蛋白表,酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞上清液中白细胞介（... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人气道上皮细胞形态特征及鉴定免疫荧光×2001A气道上皮细胞培养第4天时呈片状生长1B气道上皮细胞培养第7天时呈“铺路石”样生长1C气道上皮细胞培养第10天时细胞间排列紧密1D气道上皮细胞胞膜呈绿

安徽医科大学硕士学位论文图2.IAV感染对气道上皮细胞中TLR7、NF-κB蛋白表达及细胞上清液中IL-6、TNF-α表达的影响（1：NHBE（正常气道上皮细胞）组；2：NHBE+IAV（正常气道上皮细胞+A型流感病毒）组；3：DHBE（慢阻肺气道上皮细胞）组；4：DHBE+IAV（慢阻肺气道上皮细胞+A型流感病毒）组；实验在96孔板进行，重复6次；a：NHBE+IAV组、DHBE组、DHBE+IAV组与NHBE组比P<0.01；DHBE+IAV组与DHBE组比P<0.01）。5.3TLR7siRNA下调气道上皮细胞中TLR7和NF-κB蛋白的表达比较NHBE组、NHBE+TLR7siRNA组、DHBE组、DHBE+TLR7siRNA组中TLR7、NF-κB蛋白表达水平的差异，四组间比较具有统计学意义(P<0.05)。与NHBE组相比，NHBE+TLR7siRNA组的TLR7、NF-κB蛋白表达显著下降(P<0.01)；与DHBE组相比，DHBE+TLR7siRNA组中TLR7、NF-κB蛋白表达水平显著下降(P<0.01)(3A-C)。采用ELISA法检测各组细胞培养上清液中IL-6、TNF-α的表达，趋势和WB检测TLR7、NF-κB的蛋白表达一致(3E，3F)。24

安徽医科大学硕士学位论文图3.TLR7siRNA对气道上皮细胞中TLR7、NF-κB蛋白表达及细胞上清液中IL-6、TNF-α表达的影响（1：NHBE（正常气道上皮细胞）组；2：NHBE+TLR7siRNA（正常气道上皮细胞+TLR7小干扰RNA）组；3：DHBE（慢阻肺气道上皮细胞）组；4：DHBE+TLR7siRNA（慢阻肺气道上皮细胞+TLR7小干扰RNA）组；实验在96孔板进行，重复6次；a：NHBE+TLR7siRNA组与NHBE组比P<0.05；b：DHBE+TLR7siRNA组与DHBE组比P<0.05）。6讨论COPD属于慢性气道炎症性疾病，由于长期有毒气体和有害微粒的暴露导致气道的防御功能的减退和免疫功能的低下，对呼吸道病毒感染具有明显的易感性。由于国内流感病毒疫苗接种率普遍较低，临床上流感病毒感染已成为AECOPD最常见最早的诱发因子[6,26]，病毒感染可导致COPD患者病情急性急剧加重，临床症状恶化，肺功能进行性下降，甚至呼吸衰竭，死亡率升高[27]，同时，AECOPD还可以导致其他重要脏器功能的损害，心力衰竭发生几率提高5%、病毒性脑膜炎发生几率提高4倍[28]，临床预后更差。但是，关于流感病毒诱发COPD急性加重25

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3369413