半乳糖凝集素-1在小鼠过敏性气道炎症中的作用及机制研究
发布时间：2021-09-07 09:26
半乳糖凝集素-1（Gal-1）表达于细胞胞质、细胞核、细胞内膜和外膜及细胞外基质。通过影响免疫细胞粘附、迁移、激活、信号转导、增生、分化和凋亡调节炎症过程。本研究中,我们主要针对于Gal-1在体外和体内对炎症反应的影响及其机制。1.Gal-1在金葡菌感染的巨噬细胞NF-κB炎症中的作用研究背景Gal-1在调节细胞炎症反应中发挥重要作用。目前研究发现在克氏锥虫感染巨噬细胞炎症模型中Gal-1发挥抗炎作用,但Gal-1在金黄色葡萄球菌（金葡菌）感染巨噬细胞NF-κB炎症中的抗炎作用尚未被证实。研究目的1.研究金葡菌感染巨噬细胞对Gal-1和NF-κB活化的影响2.探讨Gal-1在金葡菌介导的巨噬细胞NF-κB炎症活化中的作用研究方法1.金葡菌感染巨噬细胞活化Gal-1和NF-κB的检测金葡菌感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7 20 min、40 min、60 min、120 min。Western Blotting（WB）检测相关信号蛋白表达水平,激光共聚焦显微镜（LSCM）观察GFP-p-P65表达水平。2.r Gal-1预处理金葡菌感染巨噬细胞诱导的NF-κB炎症的检测重组Gal-1（...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
金黄色葡萄球菌感染RAW264.7细胞显著增加了Gal-1、p-ERK和p-P65的表
安徽医科大学博士学位论文403.4rGal-1通过ERK通路降低了金葡菌感染巨噬细胞激活的NF-κB炎症同时给予ERK特异性抑制剂（U0126）和rGal-1预处理金葡菌感染的RAW264.7细胞后，我们采用WesternBlotting检测p-ERK和p-P65表达水平。如图4A和4B所示，与仅给予rGal-1处理相比，同时给予U0126和rGal-1处理金葡菌感染的RAW264.7细胞显著增加了p-P65表达水平。进一步地，我们采用ELISA方法检测上清液中IL-1β和TNF-α分泌水平。如图4C所示，与仅给予rGal-1处理相比，同时给予U0126和rGal-1处理金葡菌感染的RAW264.7细胞显著增加了细胞上清液中IL-1β和TNF-α分泌水平。这些结果表明，在金葡菌感染的巨噬细胞炎症模型中，外源性Gal-1能够通过ERK通路来抑制NF-κB炎症。图4rGal-1通过ERK通路降低了金葡菌感染巨噬细胞激活的NF-κB炎症。（A）图显示0.4μg/mlrGal-1或30nMU0126预处理RAW264.7细胞24h后，金黄色葡萄球菌感染RAW264.7细胞（感染指数：10）60min。WesternBlotting检测细胞内p-ERK和p-P65的表达水平。（B）图显示了条带灰度强度的定量分析结果。
安徽医科大学博士学位论文55图1建立小鼠急性过敏性气道炎症的模型图Fig.1Establishmentofmousemodelofacuteallergicairwayinflammation.2.2.3标本收集建立模型的第18d，1%戊巴比妥钠溶液（50μg/g）腹腔注射麻醉起效后，摘眼球法取血。血标本收集在无菌EP管中，短时间内立即检测血浆中IL-17水平和anti-OVAIgE水平。将取血后的小鼠仰卧固定于固定器上（放置冰上），充分暴露胸腔，快速钝性解剖小鼠颈部充分暴露气管，将气管注射针头置入气管内，右主支气管结扎，左肺PBS灌洗（0.5ml×3次），收集支气管肺泡灌洗液（BALF），700rpm4℃离心5min，将上清吸入至新的EP管中，后-80℃保存，待BALF中检测IL-4、IL-5和Galectin-1水平。离心后细胞用200μlPBS重悬，瑞氏吉姆萨染色显微镜下行细胞分类计数。随后快速分离小鼠右肺，部分肺组织置于液氮快速冷冻后置于-80℃保存，待提取蛋白行免疫蛋白印迹（WesternBloting）检测和提取总RNA进行QPCR检测；剩余肺组织置于4%多聚甲醛溶液内固定，待之后行组织病理学检测。2.2.3细胞分类计数2.2.3.1白细胞计数（1）在收取各组小鼠BALF后，反复擦拭盖玻片和血细胞计数板以确保干净，然后在血细胞计数板上盖上盖玻片。
【参考文献】：
期刊论文
[1]新版中国支气管哮喘防治指南与全球支气管哮喘防治创议的异同[J]. 沈华浩,杜旭菲,应颂敏. 中华结核和呼吸杂志. 2018 (03)
本文编号：3389298
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
金黄色葡萄球菌感染RAW264.7细胞显著增加了Gal-1、p-ERK和p-P65的表
安徽医科大学博士学位论文403.4rGal-1通过ERK通路降低了金葡菌感染巨噬细胞激活的NF-κB炎症同时给予ERK特异性抑制剂（U0126）和rGal-1预处理金葡菌感染的RAW264.7细胞后，我们采用WesternBlotting检测p-ERK和p-P65表达水平。如图4A和4B所示，与仅给予rGal-1处理相比，同时给予U0126和rGal-1处理金葡菌感染的RAW264.7细胞显著增加了p-P65表达水平。进一步地，我们采用ELISA方法检测上清液中IL-1β和TNF-α分泌水平。如图4C所示，与仅给予rGal-1处理相比，同时给予U0126和rGal-1处理金葡菌感染的RAW264.7细胞显著增加了细胞上清液中IL-1β和TNF-α分泌水平。这些结果表明，在金葡菌感染的巨噬细胞炎症模型中，外源性Gal-1能够通过ERK通路来抑制NF-κB炎症。图4rGal-1通过ERK通路降低了金葡菌感染巨噬细胞激活的NF-κB炎症。（A）图显示0.4μg/mlrGal-1或30nMU0126预处理RAW264.7细胞24h后，金黄色葡萄球菌感染RAW264.7细胞（感染指数：10）60min。WesternBlotting检测细胞内p-ERK和p-P65的表达水平。（B）图显示了条带灰度强度的定量分析结果。
安徽医科大学博士学位论文55图1建立小鼠急性过敏性气道炎症的模型图Fig.1Establishmentofmousemodelofacuteallergicairwayinflammation.2.2.3标本收集建立模型的第18d，1%戊巴比妥钠溶液（50μg/g）腹腔注射麻醉起效后，摘眼球法取血。血标本收集在无菌EP管中，短时间内立即检测血浆中IL-17水平和anti-OVAIgE水平。将取血后的小鼠仰卧固定于固定器上（放置冰上），充分暴露胸腔，快速钝性解剖小鼠颈部充分暴露气管，将气管注射针头置入气管内，右主支气管结扎，左肺PBS灌洗（0.5ml×3次），收集支气管肺泡灌洗液（BALF），700rpm4℃离心5min，将上清吸入至新的EP管中，后-80℃保存，待BALF中检测IL-4、IL-5和Galectin-1水平。离心后细胞用200μlPBS重悬，瑞氏吉姆萨染色显微镜下行细胞分类计数。随后快速分离小鼠右肺，部分肺组织置于液氮快速冷冻后置于-80℃保存，待提取蛋白行免疫蛋白印迹（WesternBloting）检测和提取总RNA进行QPCR检测；剩余肺组织置于4%多聚甲醛溶液内固定，待之后行组织病理学检测。2.2.3细胞分类计数2.2.3.1白细胞计数（1）在收取各组小鼠BALF后，反复擦拭盖玻片和血细胞计数板以确保干净，然后在血细胞计数板上盖上盖玻片。
【参考文献】：
期刊论文
[1]新版中国支气管哮喘防治指南与全球支气管哮喘防治创议的异同[J]. 沈华浩,杜旭菲,应颂敏. 中华结核和呼吸杂志. 2018 (03)
本文编号：3389298
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