胶体金免疫层析法检测念珠菌抗原对侵袭性念珠菌肺炎的诊断价值

发布时间：2021-09-19 12:32

　　随着人口老年化、肿瘤发病率升高、ICU患者的增多、免疫抑制药物的广泛使用,侵袭性真菌肺炎（invasive fungal pneumonia,IFP）的发病率逐渐升高。念珠菌是引起真菌性肺炎最常见的病原菌。然而各种真菌性肺炎患者的临床特征均可以表现为咳嗽、发热、喘息等而没有特异性,影像学也无法区分出是何种病原菌造成的真菌性肺炎。确诊念珠菌性肺炎需要无菌体液和组织病理学,然而真菌性肺炎患者通常一般情况差,难以行有创检查获得病理组织,痰液及支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）等标本相对容易获得,但检验结果无法确定是感染还是定植,且诊断时间均较长。因此,现有检测方法无法满足临床对于真菌性肺炎的诊断需求。测定血或者肺泡灌洗液中的1,3-β-D-葡聚糖是目前比较常用的真菌性肺炎快速检测方法,但1,3-β-D-葡聚糖也存在于曲霉菌中,检测其并不能区分是何种类型的真菌感染。念珠菌特异性抗体、特异性抗原检测是值得探索的检测方法,但目前很少有用于临床的研究。胶体金免疫层析（colloidal gold immunochromatograhic assay... 

【文章来源】：军事科学院北京市

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

胶体金免疫层析法检测白色念珠菌抗原试剂实验原理示意图

军事科学院硕士学位论文第12页图2白色念珠菌抗体蛋白含量图3QuantityOne4.5扫描分析白色念珠菌抗体纯度1.2.4胶体金的制备胶体金是氯金酸的水溶液，在碱性环境中带有负电荷可与蛋白等大分子因静电而形成非公价结合。胶体金有多种制备方法，其中柠檬酸三钠法制备得到的胶体金溶液储存稳定性好，本研究采用的是柠檬酸三钠法制备胶体金。①精确称取氯金酸1.5g，加入三蒸水150ml溶解，使用0.22μm的微孔膜进行过滤，配置成0.01%的水溶液，倒入一个清洁硅化烧瓶中，将烧瓶放在磁力搅拌加热器上，在旋转状态下，小火加热15分钟。②在磁转子的搅拌下用移液器吸取1.5ml的1%柠檬酸三钠水溶液加入硅化烧瓶中，液体的颜色由金色变为亮红色，提示着胶体金颗粒分散形成。③继续煮10分钟，达到反应终点，溶液逐渐稳定成透明的葡萄酒样红色，关掉加热旋钮。放在28℃温度下冷却，即为25nm大小的胶体金颗粒。倒入玻璃瓶中密封，放置在4℃的冰箱中备用。1.2.5胶体金标记白色念珠菌抗体的最佳pH胶体金与白色念珠菌抗体结合受PH的影响。一个胶体金颗粒会结合多个白色

军事科学院硕士学位论文第12页图2白色念珠菌抗体蛋白含量图3QuantityOne4.5扫描分析白色念珠菌抗体纯度1.2.4胶体金的制备胶体金是氯金酸的水溶液，在碱性环境中带有负电荷可与蛋白等大分子因静电而形成非公价结合。胶体金有多种制备方法，其中柠檬酸三钠法制备得到的胶体金溶液储存稳定性好，本研究采用的是柠檬酸三钠法制备胶体金。①精确称取氯金酸1.5g，加入三蒸水150ml溶解，使用0.22μm的微孔膜进行过滤，配置成0.01%的水溶液，倒入一个清洁硅化烧瓶中，将烧瓶放在磁力搅拌加热器上，在旋转状态下，小火加热15分钟。②在磁转子的搅拌下用移液器吸取1.5ml的1%柠檬酸三钠水溶液加入硅化烧瓶中，液体的颜色由金色变为亮红色，提示着胶体金颗粒分散形成。③继续煮10分钟，达到反应终点，溶液逐渐稳定成透明的葡萄酒样红色，关掉加热旋钮。放在28℃温度下冷却，即为25nm大小的胶体金颗粒。倒入玻璃瓶中密封，放置在4℃的冰箱中备用。1.2.5胶体金标记白色念珠菌抗体的最佳pH胶体金与白色念珠菌抗体结合受PH的影响。一个胶体金颗粒会结合多个白色

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3401619