NDRG2基因通过Zc3h12d酶在核转录因子-κB传导通路调控中的作用机制
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【摘要】:目的:研究NDRG2基因与Zc3hl2d酶在核转录因子(Nuclear Transcription Factor, NF)-κB传导通路调控中的作用机制。方法:(1)用脂多糖(LPS)刺激人支气管气道上皮(16HBE)细胞株,来构建炎性刺激时气道黏液高分泌模型,用瞬时转染过表达NDRG2和zc3h12d siRNA干扰下调16HBE,(2)将细胞分成如下组:A:瞬时转染过表达NDRG2组;B:瞬时转染过表达NDRG2组+zc3h12d siRNA干扰下调组;C:瞬时转染zc3h12d siRNA干扰下调组;D:转染空白载体组;E:未做任何处理的16HBE细胞作为对照组。(3)倒置荧光显微镜观察转染效率,反转录PCR (RT-PCR)检测气道黏蛋白(Mucin, MUC) 5AC mRNA的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测IL-1β、IL-6等炎症因子及MUC5AC的分泌水平,Western印迹法检测Zc3h12d、NF-κB p65的分泌水平,激光共聚焦法检测16HBE细胞内MUC5AC表达。结果:(1)NDRG2转染后其蛋白表达明显增多,提示转染成功。Zc3h12d siRNA转染后,其表达蛋白减少,提示转染成功。光镜下检测NDRG2及Zc3h12d的转染效率,结果显示NDRG2效率约65%,Zc3h12d转染效率约50%。(2)给予LPS刺激后,RT-PCR测定MUC5AC mRNA较未做任何处理的对照组明显升高(p0.05)。当细胞过表达NDRG2, RT-PCR测定MUC5AC mRNA较LPS刺激转染空质粒组明显下降(p0.05)。但同时使细胞过表达NDRG2和下调Zc3h12d, MUC5AC mRNA较单纯过表达NDRG2组明显升高(p0.05),而下调zc3h12d组无明显差异(p0.05)。(3)给予LPS刺激后,NF-κB p65的表达较未做任何处理的对照组明显增多,而Zc3h12d较未做任何处理的对照组明显减少。当细胞过表达NDRG2, Western-blot法检测表明Zc3h12d表达较空白转染组增多,而相应的NF-κB p65表达明显降低(p0.05)。但同时过表达NDRG2和下调Zc3h12d组,相应的NF-κB p65表达较单纯过表达NDRG2组表达明显升高(p0.05),但较瞬时转染zc3h12d siRNA干扰下调组无明显差异(p0.05)。结论:(1)LPS刺激炎症因子和MUC5AC分泌增多;(2) NDRG2过表达抑制炎症因子及MUC5AC的表达;(3)本实验提示NDRG2和Zc3h12d的表达有相关性,NDRG2可通过Zc3h12d实现对NF-κB传导通路的调控。
【关键词】:核转录因子-κB NDRG2 Zc3h12d 黏蛋白
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R563.9
【目录】:
- 英汉缩略语名词对照5-7
- 中文摘要7-10
- 英文摘要10-12
- 前言12-13
- 1 材料与方法13-16
- 1.1 主要材料及试剂13
- 1.2 方法13-15
- 1.3 统计学分析15-16
- 2 结果16-19
- 2.1 重组表达质粒其转染细胞表达情况的鉴定16
- 2.2 RT-PCR检测MUC5AC的转录水平16-17
- 2.3 Western-blot检测Zc3h12d、NF-κB p65的表达水平17
- 2.4 ELISA法检测IL-1β、IL-6炎症因子及MUC5AC表达水平17-18
- 2.5 激光免疫共聚焦检测细胞内MUC5AC表达水平18-19
- 3. 讨论19-22
- 全文总结22-23
- 参考文献23-25
- 文献综述25-33
- 参考文献30-33
- 致谢33-34
- 硕士期间发表的论文34
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本文编号:340982
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