USP7对吸烟引起的肺损伤的保护作用

发布时间：2021-10-01 00:39

　　吸烟是困扰全世界人民健康的问题,每年因吸烟死亡的人数达到700万,而且还在不断增长,缓解吸烟引起的损伤成为值得研究的课题。泛素特异性蛋白酶7（USP7）是目前USPs家族中被研究地最多的成员之一。已知USP7参与的功能包括:细胞周期调节、免疫应激、信号通路、癌症靶标和DNA损伤等。为了研究USP7在吸烟引起的肺细胞和组织损伤中产生的影响,我们建立了Usp7高表达的肺癌细胞株、小鼠胚胎成纤维细胞株以及Usp7特异性敲入的小鼠模型。通过用烟雾提取液CSE处理细胞的方式建立吸烟导致的肺细胞损伤模型,给小鼠吸烟30d的方式建立小鼠吸烟模型。后续通过western blot、免疫荧光、β-gal等实验检测损伤相关指标的变化。我们的结果发现吸烟导致端粒DNA损伤,而USP7能起到缓解作用。免疫荧光和β-gal实验显示吸烟导致细胞增殖停滞、衰老程度加深,Usp7高表达能起到保护作用。小鼠的呼吸功能检测显示,Usp7特异性敲入小鼠能缓解吸烟引起的呼吸功能减弱。肺组织切片的HE染色、Masson染色、羟脯氨酸含量测定、炎症因子MCP1的ELISA实验结果,表明吸烟引起的肺纤维化能在Usp7特异性敲入的小... 

【文章来源】：杭州师范大学浙江省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Usp7基因在人不同组织中的表达量（引自GeneCard）

图 1.2 Usp7 基因在小鼠不同组织中的表达量（引自 Gene Card）USP7 蛋白包含四个结构域：一个 N-氨基末端的 TRAF 区域，一个酶催化活性中心（aa208-560）和两个 C-羧基末端结构域[16]，其中 TRAF 区域和 64kDa 的C-羧基末端区域是 USP7 与上下游蛋白结合的重要部位。TRAF 区域负责直接与底物蛋白相结合，比如 P53、MDM2、MDMX、EBNA1 蛋白等[17][18]（图 1.3）。酶催化活性中心包含两个高度保守区域：组氨酸盒和半胱氨酸盒[19]。C 端区域含有 2 个泛素连接酶和 5 个 UBL，2 个泛素连接酶能与泛素相互作用[20]，5 个 UBL中的 UBL-4/5 是直接活化 USP7 酶活性的关键区域，而 UBL-1、UBL-2 和 UBL-3对 USP7 的活化起到间接作用，是通过与 GMP 合成酶结合引起一系列反应的[21]。另一个 C-末端的结构域可与 MDM2 相互作用[22]。

图 1.2 Usp7 基因在小鼠不同组织中的表达量（引自 Gene Card）SP7 蛋白包含四个结构域：一个 N-氨基末端的 TRAF 区域，一个酶催化（aa208-560）和两个 C-羧基末端结构域[16]，其中 TRAF 区域和 64kDa末端区域是 USP7 与上下游蛋白结合的重要部位。TRAF 区域负责直接白相结合，比如 P53、MDM2、MDMX、EBNA1 蛋白等[17][18]（图 1.3活性中心包含两个高度保守区域：组氨酸盒和半胱氨酸盒[19]。C 端区域泛素连接酶和 5 个 UBL，2 个泛素连接酶能与泛素相互作用[20]，5 个 UBL-4/5 是直接活化 USP7 酶活性的关键区域，而 UBL-1、UBL-2 和 UBL7 的活化起到间接作用，是通过与 GMP 合成酶结合引起一系列反应的[2 C-末端的结构域可与 MDM2 相互作用[22]。


本文编号：3416931