甲状腺素对气道黏蛋白5AC基因表达的影响及其调控机制

发布时间：2021-10-06 18:13

　　目的:观察甲状腺素对气道上皮细胞黏蛋白（mucin,MUC）5AC表达的影响及其调控机制。方法:1、MUC5AC在A549细胞中的表达:体外培养A549细胞,以不同浓度的甲状腺素刺激A549细胞24h后,用ELISA法检测上清液中MUC5AC蛋白含量,用RT-PCR法检测细胞中MUC5ACmRNA水平。2、设计、构建MUC5AC基因5’上游序列的表达质粒:根据MUC5AC基因5’调控区的DNA序列、表达载体pGL3质粒的结构特点及实验需要设计PCR扩增引物,以人基因组总DNA为模板扩增MUC5AC基因5’非编码区片段,双酶切后插入pGL3质粒构成重组质粒。重组质粒经酶切和DNA测序鉴定证实构建成功后,用脂质体将表达质粒和内参照质粒共转染A549细胞,培养24h后,加入甲状腺素（浓度为6.5ng/ml）处理,继续孵育24h收集细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定报告基因的表达水平。结果:1、用ELISA法检测A549细胞培养上清液中MUC5AC蛋白的表达显示,甲状腺素可成浓度、时间依赖性地使A549细胞MUC5AC蛋白表达水平下降,与对照组比较差异有统计学意义。用RT-PCR法检测M... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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总RNA电泳图

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重庆医科大学硕士研究生学位论文Z000bP一图2一4基因组DNA电泳图M:分子量标准;1一2:基因组DNA电泳结果FigZ一 4AgarosegeleleetroPhoresisofgenomeDNAM:DL一 2000DNAladder:Lanesl一 2:eleetroPhoresisresultofgenomeDNA2.2荧光素酶报告基因载体pGL3一Ehancer质粒酶切鉴定荧光素酶报告基因载体pGL3一Ehancer质粒经KPnl酶切后，琼脂糖凝胶电泳显示单一条带，约为so64bp，与文献报道一致。图2一5质粒pGL3一 EnhancerKpnl单酶切电泳图M:分子量标准卜2:质拉pGL3一Enh:ncer单酶切后 F192一 5AnalysisofPlasmidPGL3一EnhancerdigestedwithKPnIrestrietionenzyme LaneM:IkbDNAmarker:lanesl&2:resultofPGL3一EnhaneerdigestedbyKPnl36

【参考文献】：
期刊论文
[1]慢性阻塞性肺疾病患者气道粘蛋白分子表型的研究[J]. 周向东,童瑾,兰箭.  中华结核和呼吸杂志. 2002(07)
[2]慢性阻塞性肺病患者免疫功能的研究[J]. 黄奕江,冯夏,郑万川.  临床内科杂志. 1997(01)



本文编号：3420509