支架蛋白Gab1调节肺泡表面活性蛋白合成并抵抗肺纤维化损伤的研究
发布时间：2017-05-03 03:16
本文关键词：支架蛋白Gab1调节肺泡表面活性蛋白合成并抵抗肺纤维化损伤的研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：1.目的和意义 支架蛋白Gabs (Grb2-assosiated binders)家族广泛参与了酪氨酸磷酸化修饰,其调控方式主要通过招募、绑定并活化相关酪氨酸磷酸酶等重要下游分子,起到放大相应信号的作用。Gab1是Gabs家族中表达量最高,表达最广泛的一员。目前Gab1在呼吸系统中的在体研究尚无文献报道。预实验中我们发现小鼠肺部炎症模型中Gabs蛋白表达升高,结合不久前Gab1作为支气管哮喘易感基因的报道,我们预测Gab1在炎症性肺疾病中存在调控机制。 我们在体外研究中发现,沉默鼠二型肺泡上皮细胞系Gab1转录导致表面活性蛋白(surfactant proteins, SPs)表达下降。二型肺泡上皮(AT-Ⅱ)是肺损伤的主要靶细胞,尽管整个过程中炎症刺激的意义尚不明确,但AT-Ⅱ受损及异常修复可进一步导致肺纤维化的发生。肺纤维化是以肺成纤维细胞增殖及细胞外基质聚集为特征的病变,是严重威胁人类健康的疾病,且确切发病机制尚不清楚,防治手段有限。目前已知肺纤维化发生与纤维化相关基因及群体基因、多种细胞因子的异常表达,以及纤维化相关信号转导途径的激活等有一定关系。 Gab1与肺部炎症以及后续炎症修复的关系如何,我们进行了后续研究。 2.研究方法 利用Cre-loxp系统结合反式tetO激活系统构建了可诱导二型肺泡上皮Gab1定向敲除模型。鉴定小鼠敲除效率后我们观察了小鼠表型,用体积描计箱检测小鼠肺动态顺应性,分析表面活性蛋白表达情况,并从亚细胞层面观察了Gab1缺失对AT-Ⅱ结构的影响。本底敲除Gab1并未引起小鼠肺部炎症改变,我们进一步观察了博来霉素诱导的肺纤维化模型中小鼠表型,在慢性炎症过程中Gab1缺失导致了最终纤维化损伤加重。最后,我们构建了Gab1点突变质粒,进一步讨论Gab1如何通过下游通路影响肺稳态。 3.研究结果 3.1可诱导二型肺泡上皮Gab1定向敲除小鼠(Gab1△/△)肺泡表面活性蛋白表达下降,AT-Ⅱ板层小体形态异常； 3.2Gab1△/Δ在肺纤维化模型后期体重不再增加,纤维化损伤加重； 3.3Gab1的缺失阻断多条生长因子参与的肺损伤修复通路； 3.4体外过表达Gab1突变质粒引起肺泡表面活性蛋白表达下降。 4.结论 4.1Gab1通过TTF-1、ABCA3调控肺泡表面活性蛋白的合成,进而影响肺功能； 4.2Gab1在肺纤维化损伤中起到保护作用,Gab1缺失导致博来霉素诱导的模型中Gab1△/△纤维化损伤加重； 4.3Gab1维持了多条肺损伤修复信号通路； 4.4Gab1通过SHP2或PI3K途径调控了肺泡表面活性蛋白表达,维持肺稳态。
【关键词】：肺泡表面活性蛋白 Gab1 TTF-1 肺纤维化 SHP2
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563
【目录】：
- 致谢4-5
- 中文摘要5-7
- Abstract7-9
- 英文缩略词9-11
- 目录11-13
- 1 引言13-15
- 2 材料与试剂15-19
- 2.1 主要仪器15
- 2.2 主要试剂15-16
- 2.3 实验材料16-17
- 2.4 缓冲液和溶液配置17-19
- 3 实验方法19-25
- 3.1 实验动物系的建立19-20
- 3.2 小鼠肺动态顺应性检测20-21
- 3.3 BLM诱导小鼠肺纤维化模型的制备21
- 3.4 动物标本采集21-22
- 3.5 酶联免疫吸附实验(ELISA)22-23
- 3.6 Gab1点突变质粒构建23-24
- 3.7 统计24-25
- 4 实验结果25-36
- 4.1 可诱导二型肺泡上皮细胞Gab1定向敲除小鼠的构建25-27
- 4.2 Gab1敲除小鼠肺泡表面活性蛋白合成下降27-29
- 4.3 Gab1~(Δ/△)加重博来霉素诱导的肺纤维化29-32
- 4.4 Gab1维持肺损伤修复信号通路32-34
- 4.5 Gab1主要通过SHP2和PI3K通路调控肺稳态34-36
- 5 讨论36-39
- 参考文献39-42
- 综述42-51
- References47-51
- 作者简历及在读期间所获得科研成果51
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1 杨s
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