STAT1特异性siRNA真核表达载体的构建及其对16HBE细胞中STAT1蛋白表达的影响

发布时间：2021-10-26 16:10

　　目的:信号转导和转录激活因子1（STAT1）是STAT家族中第一个被发现的转录因子,参与IFN的信号转导过程,为先天性免疫所必需。IFN-γ等细胞因子通过JAK-STAT途径激活STAT1而诱导目的基因表达,参与细胞因子介导的信号转导过程,导致气道的炎症和高反应性,而支气管哮喘气道炎症常与气道上皮细胞STAT1途径的信号传导异常有关。本研究通过设计针对STAT1的发夹样RNA干扰重组体,用脂质体转染IFN-γ刺激后的人气道上皮细胞（16HBE）,研究其对16HBE细胞中STAT1蛋白表达的影响,检测其干扰活性,为探讨支气管哮喘等炎症性疾病的基因治疗奠定基础。方法:本研究分两部分进行:1. STAT1特异性siRNA真核表达载体的构建:根据GeneBank数据库提供的STAT1基因两种变异体的共同核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链siRNA,最后选择两条片段作为STAT1基因干扰片段;另设计一条由任一个片段随机重排而成的阴性对照;再分别转化为能表达其shRNA的互补DNA序列,经退火形成双链,将其连接到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的pGenesil-1.1真核表达载... 

【文章来源】：西南医科大学四川省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pGenesil-1.1载体Fig.1pGenesil-1.1vector

质粒线性化的琼脂糖凝胶鉴定1489bp


本文编号：3459805