过表达SOCS1的DCs干预Th17细胞因子参与COPD小鼠免疫调节的研究

发布时间：2021-10-30 09:53

　　目的:通过体外培养过表达SOCS1的未成熟DCs（imDCs）,并将不同类型的DCs及不同浓度的DC-SOCS1回输干预COPD小鼠,观察其BALF及肺组织中Th17细胞因子的变化,进一步阐明过表达SOCS1的imDCs通过调节Th17分泌的相关细胞因子在COPD免疫调节中的作用。方法:1、从小鼠胫骨和股骨中洗出骨髓细胞,用白介素-4、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子诱导im DCs形成。2、用过表达SOCS1的慢病毒感染原代分离培养第5天但未经LPS刺激的imDCs,构建过表达SOCS1的imDCs,即DCs-SOCS1,WB检测DCs-SOCS1内SOCS1的表达。3、细胞培养第7天加入LPS诱导成熟,对所培养的细胞,通过流式细胞术和扫描电镜分别对其表面分子标记物CD80、CD83和细胞形态进行鉴定。4、将42只C57BL/6小鼠随机分成7个组,每组6只,分别为烟熏第1天回输NS组,烟熏第1天回输DCs-SOCS1（1×10⁶）组,烟熏第1天回输DCs-SOCS1（2×10⁶）组,烟熏第1天回输imDCs（1×10⁶）组... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

COPD模型构建

6回输（0.1ml/10g）（烟熏第 7 天注射）图4 细胞过继免疫COPD小鼠1.2.8 ELISA 检测各组小鼠 BALF、肺组织中 IL-21 浓度变化1.2.8.1 样本收集处理（1）BALF：用无菌管收集样本，2000rpm 离心 20min，收集上清。（2）肺组织：切割样本后，称取重量。加入适量的 PBS，用液氮冷冻保存。样本在 4℃的条件下融化。加入 PBS，PBS 的量是组织的九分之一。用匀浆器将样本匀浆，2000rpm 离心 20min，最后小心收集上清液。1.2.8.2 ELISA 检测 IL-21 浓度按照 ELISA 试剂盒说明进行操作。1.3 统计学方法各数据以均数±标准差表示

遵义医学院硕士学位论文 袁2 实验结果2.1 骨髓源 DCs 的提取、培养及鉴定将所需的骨髓细胞从小鼠胫骨和股骨中洗出，对细胞进行计数，向骨髓细胞中入白介素-4、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子诱导其向 imDCs 方向分化。观察到细呈小圆形，无伪足样突起(图 5A-E)，在细胞培养第 7 天加入 LPS 诱导成熟，观察胞发现其伸出伪足样突起(图 5F)。扫描电镜观察该类细胞伸出树枝状突起，此为典mDCs 形态(图 8 ) 。进一步用流式细胞术检测 DCs 成熟标志物 CD80、CD83 表达结果显示 CD80 表达阳性细胞为 56.34%(图 6)，CD83 表达阳性细胞为 78%(图 7)。上结果均表明：本实验提取、培养的细胞主要为 imDCs，且经 LPS 刺激后能正常熟。

【参考文献】：
期刊论文
[1]慢性阻塞性肺疾病发病机制最新研究进展[J]. 丁宁,王胜.  临床肺科杂志. 2016(01)
[2]吸烟对稳定期慢性阻塞性肺疾病患者Th17/Treg T细胞亚群及其相关细胞因子的影响[J]. 徐丹,龚理,徐倩,王晶,姜敏,高振,李风森.  中国呼吸与危重监护杂志. 2015(01)
[3]SOCS1基因修饰对树突状细胞成熟及细胞因子分泌的影响[J]. 于晓春,罗时敏,黄昭,刘继云.  广东医学. 2013(02)
[4]慢性阻塞性肺疾病发病机制的发展状况[J]. 余国辉,陈敏.  临床肺科杂志. 2010(01)
[5]COPD急性加重期患者诱导痰白细胞介素17和中性粒细胞CD11b/CD18的测定及意义[J]. 刘晓丽,欧阳瑶,张龙举,方宁.  遵义医学院学报. 2009(03)



本文编号：3466519