用于精准诊断特发性肺纤维化和肺癌的新型分子影像探针
发布时间：2021-11-19 14:17
目的:特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是一种肺间质性疾病,因其病因复杂,发病机制不明而使其诊断和治疗面临巨大的困难。基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）尤其是 MMP-2,MMP-9,MMP-14 目前认为在 IPF的疾病进程中起到促进作用。本文通过设计合成一种新型近红外探针,可用于实时动态监测IPF进程中MMPs变化,并抑制MMPs活性达到缓解IPF疾病进展的目的。方法:化学合成目标探针,花菁为荧光团,MMPs抑制剂异羟肟酸为定位基团,二者通过点击化学连接到一起。利用探针荧光和MMP-2,MMP-9,MMP-14荧光直标一抗荧光共定位性评估探针识别MMPs能力。构建TGF-β1刺激24,48,72小时不同时期细胞纤维化模型,观察探针荧光强度变化,并用酶联免疫吸附（ELISA）实验定量检测MMP-2,MMP-9和MMP-14含量。构建正常组和博莱霉素造模3,7,9,14,21,28天小鼠,用探针观察小鼠肺纤维化不同时期,探针荧光强度变化。结果:化合物IRGP-710经核磁共振和质谱确定是所设计...
【文章来源】：滨州医学院山东省
【文章页数】：119 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１探针设计策略和反应机理
?加入不同浓度的ＭＭＰ－１４?（Ｏ－ｌｍｇ／ｍｌ）处理时探针在７４０－８４０ｎｍ处出现强烈的??荧光（图２ｂ）。如图２ｃ所示，当与潜在的干扰物质反应时，探针仅对ＭＭＰ－２，??ＭＭＰ－９和ＭＭＰ－１４有非常高水平的荧光发射。与ＭＭＰｓ家族其他蛋白酶（ＭＭＰ－??ｌ，ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－７）无荧光产生。这些结果表明，探针ＩＲＧＰ－７１０是一种近红外荧??光探针，具有高选择性检测ＭＭＰ－２，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１４的潜力，是肺纤维化中ＭＭＰｓ??检测的合适候选者。??３???ｂ???ｃ????４ｌｌ８＇［?ｆｆｌ?码?Ｍｉ??—／Ａ?ｆＴ＇?Ｉ?Ｉ??丨：??５５０?６（Ｋ）?６５０?７ＩＭ）?７５０?Ｘ００?？５？?７５０?７８０?８１０?ＷＯ?〇ｌｔｒ．?Ｊ．．Ｌ?—ｒｘ，?Ｍｍｒ，?ＪＪ—＿＊－Ｊ??Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）?Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）??图２探针ＩＲＧＰ－７１０光学性能和选择性。ａ）?ＩＲＧＰ－７１０?（１０?ｐＭ）在与重组人ＭＭＰ－２，?ＭＭＰ－９和??ＭＭＰ－１４?（０．５?ｍｇ／ｍｌ）孵育３０分钟后测得紫外吸收光谱。ｂ）探针ＩＲＧＰ－７１０?（１０?ｐＭ）与不同浓??度梯度的ＭＭＰ－１４?（０－ｌｍｇ／ｍｌ）孵育３０分钟后测得荧光光谱曲线，激发波长７７６ｎｍ。ｃ）探??针ＩＲＧＰ－７１０选择性。ＩＲＧＰ－７１０与待测干扰物孵育３０分钟后测得。１，重组人ＭＭＰ－１?（０．５??ｍｇ／ｍｌ）；?２，重组人?ＭＭＰ－２?（０．５ｍｇ／ｍｌ）；?３，重组人?ＭＭＰ－３?（０．５ｍｇ／ｍｌ）；?４，重组人?ＭＭＰ－??７?（０．５ｍｇ／ｍｌ）；?５
我们将ＩＲＧＰ－７１０?（１０ｎＭ，１００ｐｌ，ＤＭＳＯ：生理盐水＝１：９９，ｖ／ｖ）遙续注射小??鼠７天，对照组注射相同体积相同浓度盐水。将小鼠处死后取心，肝，脾，肺，肾??做Ｈ＆Ｅ切片，与正常小鼠病理结果相比探针组无明显异质性（图３ｃ）。综合以上??结果，我们有理由相信ＩＲＧＰ－７１０生物毒性低，可用于后续细胞和生物实验。??ａ?ｂ??ｌ．ｏＬｆｆｌＴｌＴＴＩｌＴｒｒ?酬Ａ５４０■?ＩＭＲ－Ｍ｜?＇?＊［??丨＿Ｂ丨巴??…、?〇?１２?２４?４８?７２??＾?＾?＾?．ｒｉｍｃ（ｈ＞??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ??ｃ?Ｈｅａｒｔ?Ｌｉｖｅｒ?Ｓｐｌｅｅｎ?Ｌｕｎｇ?Ｋｉｄｎｅｙ??！謂圓＿＿＿??！画＿圓＿＿画??！■圍画：＿國??图３探针丨ＲＧＰ－７Ｉ０生物毒性。ａ）探针丨ＲＧＰ－７丨０与Ａ５４９，丨ＭＲ－９０，?ＲＬＥ－６ＴＮ细胞共孵育２４??小时后细胞活力。ｂ）浓度为１０ｐＭ的探针与Ａ５４９，ＩＭＲ－９０，ＲＬＥ－６ＴＮ细胞共孵育１２，?２４，?４８，??７２小时后细胞活力。ｃ）小鼠连续注射ＩＲＧＰ－７１０（ｌ〇ｎＭ，２０〇ｎｌ，ＤＭＳＯ：生理盐水＝丨：９９，ｖ／ｖ）??７天后，取心，肝，脾，肺，肾Ｈ＆Ｅ切片。标尺为??Ｆｉｇｕｒｅ?３?Ｐｒｏｂｅ?ＩＲＧＰ－７１０?ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｔｏｘｉｃｉｔｙ．?ａ）Ｔｈｅ?ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ｐｒｏｂｅ?ＩＲＧＰ－７１０?ｗａｓ?ｉｎｃｕｂａｔｅｄ??ｗｉｔｈ?Ａ５４９
本文编号：3505217
【文章来源】：滨州医学院山东省
【文章页数】：119 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１探针设计策略和反应机理
?加入不同浓度的ＭＭＰ－１４?（Ｏ－ｌｍｇ／ｍｌ）处理时探针在７４０－８４０ｎｍ处出现强烈的??荧光（图２ｂ）。如图２ｃ所示，当与潜在的干扰物质反应时，探针仅对ＭＭＰ－２，??ＭＭＰ－９和ＭＭＰ－１４有非常高水平的荧光发射。与ＭＭＰｓ家族其他蛋白酶（ＭＭＰ－??ｌ，ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－７）无荧光产生。这些结果表明，探针ＩＲＧＰ－７１０是一种近红外荧??光探针，具有高选择性检测ＭＭＰ－２，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１４的潜力，是肺纤维化中ＭＭＰｓ??检测的合适候选者。??３???ｂ???ｃ????４ｌｌ８＇［?ｆｆｌ?码?Ｍｉ??—／Ａ?ｆＴ＇?Ｉ?Ｉ??丨：??５５０?６（Ｋ）?６５０?７ＩＭ）?７５０?Ｘ００?？５？?７５０?７８０?８１０?ＷＯ?〇ｌｔｒ．?Ｊ．．Ｌ?—ｒｘ，?Ｍｍｒ，?ＪＪ—＿＊－Ｊ??Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）?Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）??图２探针ＩＲＧＰ－７１０光学性能和选择性。ａ）?ＩＲＧＰ－７１０?（１０?ｐＭ）在与重组人ＭＭＰ－２，?ＭＭＰ－９和??ＭＭＰ－１４?（０．５?ｍｇ／ｍｌ）孵育３０分钟后测得紫外吸收光谱。ｂ）探针ＩＲＧＰ－７１０?（１０?ｐＭ）与不同浓??度梯度的ＭＭＰ－１４?（０－ｌｍｇ／ｍｌ）孵育３０分钟后测得荧光光谱曲线，激发波长７７６ｎｍ。ｃ）探??针ＩＲＧＰ－７１０选择性。ＩＲＧＰ－７１０与待测干扰物孵育３０分钟后测得。１，重组人ＭＭＰ－１?（０．５??ｍｇ／ｍｌ）；?２，重组人?ＭＭＰ－２?（０．５ｍｇ／ｍｌ）；?３，重组人?ＭＭＰ－３?（０．５ｍｇ／ｍｌ）；?４，重组人?ＭＭＰ－??７?（０．５ｍｇ／ｍｌ）；?５
我们将ＩＲＧＰ－７１０?（１０ｎＭ，１００ｐｌ，ＤＭＳＯ：生理盐水＝１：９９，ｖ／ｖ）遙续注射小??鼠７天，对照组注射相同体积相同浓度盐水。将小鼠处死后取心，肝，脾，肺，肾??做Ｈ＆Ｅ切片，与正常小鼠病理结果相比探针组无明显异质性（图３ｃ）。综合以上??结果，我们有理由相信ＩＲＧＰ－７１０生物毒性低，可用于后续细胞和生物实验。??ａ?ｂ??ｌ．ｏＬｆｆｌＴｌＴＴＩｌＴｒｒ?酬Ａ５４０■?ＩＭＲ－Ｍ｜?＇?＊［??丨＿Ｂ丨巴??…、?〇?１２?２４?４８?７２??＾?＾?＾?．ｒｉｍｃ（ｈ＞??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ??ｃ?Ｈｅａｒｔ?Ｌｉｖｅｒ?Ｓｐｌｅｅｎ?Ｌｕｎｇ?Ｋｉｄｎｅｙ??！謂圓＿＿＿??！画＿圓＿＿画??！■圍画：＿國??图３探针丨ＲＧＰ－７Ｉ０生物毒性。ａ）探针丨ＲＧＰ－７丨０与Ａ５４９，丨ＭＲ－９０，?ＲＬＥ－６ＴＮ细胞共孵育２４??小时后细胞活力。ｂ）浓度为１０ｐＭ的探针与Ａ５４９，ＩＭＲ－９０，ＲＬＥ－６ＴＮ细胞共孵育１２，?２４，?４８，??７２小时后细胞活力。ｃ）小鼠连续注射ＩＲＧＰ－７１０（ｌ〇ｎＭ，２０〇ｎｌ，ＤＭＳＯ：生理盐水＝丨：９９，ｖ／ｖ）??７天后，取心，肝，脾，肺，肾Ｈ＆Ｅ切片。标尺为??Ｆｉｇｕｒｅ?３?Ｐｒｏｂｅ?ＩＲＧＰ－７１０?ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｔｏｘｉｃｉｔｙ．?ａ）Ｔｈｅ?ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ｐｒｏｂｅ?ＩＲＧＰ－７１０?ｗａｓ?ｉｎｃｕｂａｔｅｄ??ｗｉｔｈ?Ａ５４９
本文编号：3505217
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