铜蓝蛋白在石英诱导的JNK/ERK/AP-1信号通路改变中的作用
发布时间：2021-11-23 23:14
目的探讨铜蓝蛋白（Cp）在石英诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）中JNK/ERK/AP-1信号通路改变中的作用。方法分别在100μg/ml石英作用前1 h、同时和作用后1h加入30μg/ml Cp,同时设立单独用石英和单独用Cp处理以及不做任何处理的细胞组,刺激细胞24 h后,用噻唑蓝（MTT）比色法观察Cp对石英诱导的HELF细胞增殖的影响。用100μg/ml石英分别作用于HELF细胞、转染JNK显性失活突变体质粒的HELF细胞（DN-JNK）和转染ERK显性失活突变体质粒的HELF细胞（DN-ERK）24 h;用100μg/ml石英作用1 h后,加入30μg/ml Cp作用24 h;同时设立不做任何处理的对照组。用MTT法检测分别抑制JNK和ERK后对细胞增殖的影响;用蛋白免疫印迹（Western blotting）实验检测JNK、ERK、c-Jun、c-Fos及其磷酸化水平的改变。结果石英作用1 h后加入Cp,对石英诱导的细胞增殖有促进作用,后续的实验选择这种作用模式。Cp可以明显增加JNK、ERK蛋白及磷酸化ERK（pERK）、磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化c-Jun（p-...
【文章来源】：卫生研究. 2014,43(02)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
抑制JNK后观察Cp对石英诱导的p-JNK、
第2期叶萌，等.铜蓝蛋白在石英诱导的JNK/EＲK/AP-1信号通路改变中的作用201(1)与HELF+silica组比较，P＜0.05;(2)与HELF+silica+Cp组比较，P＜0.05图3MTT实验观察抑制JNK后Cp对HELF细胞增殖的影响Figure3TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingJNK果表明Cp可以明显促进石英诱导的EＲK蛋白、p-EＲK、p-c-Jun和p-c-Fos水平的增加。转染DN-EＲK质粒后，石英以及石英和Cp同时诱导的p-EＲK和p-c-Fos的增加被抑制，p-c-Jun蛋白水平的增加没有被抑制(图4)。抑制EＲK后，Cp及石英诱导的细胞增殖没有被完全抑制，但低于Cp和石英共同作用的空载体组(图5)。说明Cp通过上游信号转导通路诱导EＲK蛋白及其磷酸化的增加，且通过EＲK/c-Fos通路进一步增强石英的促细胞增殖作用。1:HELF;2:HELF+silica;3:HELF+silica+Cp;4:DN-EＲK;5:DN-EＲK+silica;6:DN-EＲK+silica+Cp图4抑制EＲK后观察Cp对石英诱导的p-EＲK、c-Jun、p-c-Jun、c-Fos和p-c-Fos蛋白水平的影响Figure4TheeffectsofCponthelevelsofp-EＲK，c-Jun，p-c-Jun，c-Fos和p-c-FosinducedbysilicaafterinhibitingEＲK(1)与HELF+silica+Cp比较，P＜0.05图5MTT实验观察抑制EＲK后Cp对HELF细胞增殖的影响Figure5TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingEＲK3讨论尘肺病是由于长期吸入石英粉尘所致的以肺部弥漫性纤维化为主的一种疾玻Cp主要是由肝脏合成和分泌的，所以本次体外实验采用体外给予Cp的方法。显性失活突变体技术是细胞信号转导通路中常用的技术，主要通过竞争性作用抑制目的蛋白的表达水平。结果表明，100μg/ml石英处理1h后再给予30μg/mlCp，Cp对石英诱导的细胞增殖有促进作用，这种作用与JNK/c-Jun和c-Fos及EＲK/c-Fos通路有关。
第2期叶萌，等.铜蓝蛋白在石英诱导的JNK/EＲK/AP-1信号通路改变中的作用201(1)与HELF+silica组比较，P＜0.05;(2)与HELF+silica+Cp组比较，P＜0.05图3MTT实验观察抑制JNK后Cp对HELF细胞增殖的影响Figure3TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingJNK果表明Cp可以明显促进石英诱导的EＲK蛋白、p-EＲK、p-c-Jun和p-c-Fos水平的增加。转染DN-EＲK质粒后，石英以及石英和Cp同时诱导的p-EＲK和p-c-Fos的增加被抑制，p-c-Jun蛋白水平的增加没有被抑制(图4)。抑制EＲK后，Cp及石英诱导的细胞增殖没有被完全抑制，但低于Cp和石英共同作用的空载体组(图5)。说明Cp通过上游信号转导通路诱导EＲK蛋白及其磷酸化的增加，且通过EＲK/c-Fos通路进一步增强石英的促细胞增殖作用。1:HELF;2:HELF+silica;3:HELF+silica+Cp;4:DN-EＲK;5:DN-EＲK+silica;6:DN-EＲK+silica+Cp图4抑制EＲK后观察Cp对石英诱导的p-EＲK、c-Jun、p-c-Jun、c-Fos和p-c-Fos蛋白水平的影响Figure4TheeffectsofCponthelevelsofp-EＲK，c-Jun，p-c-Jun，c-Fos和p-c-FosinducedbysilicaafterinhibitingEＲK(1)与HELF+silica+Cp比较，P＜0.05图5MTT实验观察抑制EＲK后Cp对HELF细胞增殖的影响Figure5TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingEＲK3讨论尘肺病是由于长期吸入石英粉尘所致的以肺部弥漫性纤维化为主的一种疾玻Cp主要是由肝脏合成和分泌的，所以本次体外实验采用体外给予Cp的方法。显性失活突变体技术是细胞信号转导通路中常用的技术，主要通过竞争性作用抑制目的蛋白的表达水平。结果表明，100μg/ml石英处理1h后再给予30μg/mlCp，Cp对石英诱导的细胞增殖有促进作用，这种作用与JNK/c-Jun和c-Fos及EＲK/c-Fos通路有关。
【参考文献】：
期刊论文
[1]KGF及KGFR共表达促进铁过载肝细胞增殖[J]. 安树才,张智斌. 中国实验诊断学. 2013(10)
[2]矽尘对人血铜蓝蛋白水平和碱性磷酸酶活力的影响[J]. 邹伟明,张海英,廖瑞庆,李和林,林锦芬,陈福明,杨洁芳,李荣娟. 中国职业医学. 2007(02)
[3]尘肺清颗粒对大鼠实验性矽肺的药效观察[J]. 朱建伟,孔捷,孙付军,陆永辉,李贵海. 中国职业医学. 2006(05)
[4]血清唾液酸及铜蓝蛋白对尘肺早期肺纤维化的意义[J]. 娄克俭. 中华劳动卫生职业病杂志. 2006(02)
[5]Ceruloplasmin or Fibronectin Synergism with Quartz Dust on Stimulating Collagen Gene Transcription in Human 2BS Fibroblast[J]. LIU BING-CI; YOU BAO-RONG; LIU YU-YING; WANG GENG-FU;MIAO QIN AND LI YU-RUI (Institute of Occupational Medicine, Chinese Academy of Preventive Medicine,Beijing 100050, China). Biomedical and Environmental Sciences. 1995(03)
[6]铜蓝蛋白对成纤维细胞作用的进一步研究[J]. 蔡国平,陈守蒙,杨霁虹,李玉瑞. 卫生研究. 1985(04)
[7]细胞外信号调节激酶通路对二氧化硅活化的肺成纤维细胞增殖的影响[J]. 冯莉,王献华,彭海兵,朱兰. 中华劳动卫生职业病杂志. 2010 (08)
[8]矽肺患者巨噬细胞培养上清通过p38MAPK对人胚肺成纤维细胞增殖的影响[J]. 彭海兵,王献华,冯莉,吴爱萍. 中华劳动卫生职业病杂志. 2010 (11)
[9]石英通过丝裂素活化蛋白激酶通路引起人胚肺成纤维细胞周期的改变[J]. 贾效伟,刘秉慈,叶萌,刘海峰,张凤梅. 中华劳动卫生职业病杂志. 2011 (07)
本文编号：3514805
【文章来源】：卫生研究. 2014,43(02)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
抑制JNK后观察Cp对石英诱导的p-JNK、
第2期叶萌，等.铜蓝蛋白在石英诱导的JNK/EＲK/AP-1信号通路改变中的作用201(1)与HELF+silica组比较，P＜0.05;(2)与HELF+silica+Cp组比较，P＜0.05图3MTT实验观察抑制JNK后Cp对HELF细胞增殖的影响Figure3TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingJNK果表明Cp可以明显促进石英诱导的EＲK蛋白、p-EＲK、p-c-Jun和p-c-Fos水平的增加。转染DN-EＲK质粒后，石英以及石英和Cp同时诱导的p-EＲK和p-c-Fos的增加被抑制，p-c-Jun蛋白水平的增加没有被抑制(图4)。抑制EＲK后，Cp及石英诱导的细胞增殖没有被完全抑制，但低于Cp和石英共同作用的空载体组(图5)。说明Cp通过上游信号转导通路诱导EＲK蛋白及其磷酸化的增加，且通过EＲK/c-Fos通路进一步增强石英的促细胞增殖作用。1:HELF;2:HELF+silica;3:HELF+silica+Cp;4:DN-EＲK;5:DN-EＲK+silica;6:DN-EＲK+silica+Cp图4抑制EＲK后观察Cp对石英诱导的p-EＲK、c-Jun、p-c-Jun、c-Fos和p-c-Fos蛋白水平的影响Figure4TheeffectsofCponthelevelsofp-EＲK，c-Jun，p-c-Jun，c-Fos和p-c-FosinducedbysilicaafterinhibitingEＲK(1)与HELF+silica+Cp比较，P＜0.05图5MTT实验观察抑制EＲK后Cp对HELF细胞增殖的影响Figure5TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingEＲK3讨论尘肺病是由于长期吸入石英粉尘所致的以肺部弥漫性纤维化为主的一种疾玻Cp主要是由肝脏合成和分泌的，所以本次体外实验采用体外给予Cp的方法。显性失活突变体技术是细胞信号转导通路中常用的技术，主要通过竞争性作用抑制目的蛋白的表达水平。结果表明，100μg/ml石英处理1h后再给予30μg/mlCp，Cp对石英诱导的细胞增殖有促进作用，这种作用与JNK/c-Jun和c-Fos及EＲK/c-Fos通路有关。
第2期叶萌，等.铜蓝蛋白在石英诱导的JNK/EＲK/AP-1信号通路改变中的作用201(1)与HELF+silica组比较，P＜0.05;(2)与HELF+silica+Cp组比较，P＜0.05图3MTT实验观察抑制JNK后Cp对HELF细胞增殖的影响Figure3TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingJNK果表明Cp可以明显促进石英诱导的EＲK蛋白、p-EＲK、p-c-Jun和p-c-Fos水平的增加。转染DN-EＲK质粒后，石英以及石英和Cp同时诱导的p-EＲK和p-c-Fos的增加被抑制，p-c-Jun蛋白水平的增加没有被抑制(图4)。抑制EＲK后，Cp及石英诱导的细胞增殖没有被完全抑制，但低于Cp和石英共同作用的空载体组(图5)。说明Cp通过上游信号转导通路诱导EＲK蛋白及其磷酸化的增加，且通过EＲK/c-Fos通路进一步增强石英的促细胞增殖作用。1:HELF;2:HELF+silica;3:HELF+silica+Cp;4:DN-EＲK;5:DN-EＲK+silica;6:DN-EＲK+silica+Cp图4抑制EＲK后观察Cp对石英诱导的p-EＲK、c-Jun、p-c-Jun、c-Fos和p-c-Fos蛋白水平的影响Figure4TheeffectsofCponthelevelsofp-EＲK，c-Jun，p-c-Jun，c-Fos和p-c-FosinducedbysilicaafterinhibitingEＲK(1)与HELF+silica+Cp比较，P＜0.05图5MTT实验观察抑制EＲK后Cp对HELF细胞增殖的影响Figure5TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingEＲK3讨论尘肺病是由于长期吸入石英粉尘所致的以肺部弥漫性纤维化为主的一种疾玻Cp主要是由肝脏合成和分泌的，所以本次体外实验采用体外给予Cp的方法。显性失活突变体技术是细胞信号转导通路中常用的技术，主要通过竞争性作用抑制目的蛋白的表达水平。结果表明，100μg/ml石英处理1h后再给予30μg/mlCp，Cp对石英诱导的细胞增殖有促进作用，这种作用与JNK/c-Jun和c-Fos及EＲK/c-Fos通路有关。
【参考文献】：
期刊论文
[1]KGF及KGFR共表达促进铁过载肝细胞增殖[J]. 安树才,张智斌. 中国实验诊断学. 2013(10)
[2]矽尘对人血铜蓝蛋白水平和碱性磷酸酶活力的影响[J]. 邹伟明,张海英,廖瑞庆,李和林,林锦芬,陈福明,杨洁芳,李荣娟. 中国职业医学. 2007(02)
[3]尘肺清颗粒对大鼠实验性矽肺的药效观察[J]. 朱建伟,孔捷,孙付军,陆永辉,李贵海. 中国职业医学. 2006(05)
[4]血清唾液酸及铜蓝蛋白对尘肺早期肺纤维化的意义[J]. 娄克俭. 中华劳动卫生职业病杂志. 2006(02)
[5]Ceruloplasmin or Fibronectin Synergism with Quartz Dust on Stimulating Collagen Gene Transcription in Human 2BS Fibroblast[J]. LIU BING-CI; YOU BAO-RONG; LIU YU-YING; WANG GENG-FU;MIAO QIN AND LI YU-RUI (Institute of Occupational Medicine, Chinese Academy of Preventive Medicine,Beijing 100050, China). Biomedical and Environmental Sciences. 1995(03)
[6]铜蓝蛋白对成纤维细胞作用的进一步研究[J]. 蔡国平,陈守蒙,杨霁虹,李玉瑞. 卫生研究. 1985(04)
[7]细胞外信号调节激酶通路对二氧化硅活化的肺成纤维细胞增殖的影响[J]. 冯莉,王献华,彭海兵,朱兰. 中华劳动卫生职业病杂志. 2010 (08)
[8]矽肺患者巨噬细胞培养上清通过p38MAPK对人胚肺成纤维细胞增殖的影响[J]. 彭海兵,王献华,冯莉,吴爱萍. 中华劳动卫生职业病杂志. 2010 (11)
[9]石英通过丝裂素活化蛋白激酶通路引起人胚肺成纤维细胞周期的改变[J]. 贾效伟,刘秉慈,叶萌,刘海峰,张凤梅. 中华劳动卫生职业病杂志. 2011 (07)
本文编号：3514805
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