miR-154上调Wnt/β-catenin信号通路在小鼠肺成纤维细胞L929表型转化中的作用及机制

发布时间：2022-01-05 00:39

　　研究目的:1、L929被TGF-β1刺激后miR-154的表达变化;2、过表达、干扰miR-154对L929生物学特性的影响;3、初步探索miR-154通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进L929表型转化的分子机制。研究方法:1、TGF-β1刺激L929表型转化为肺肌成纤维细胞;2、将上述细胞分为5组:空白对照（Blank）组,干扰慢病毒空载体（sh-NC）组,过表达慢病毒空载（MCS-SV40-NC）组,干扰慢病毒（shmiR-154）组,过表达慢病毒（MCS-SV-miR-154）组分别转染肺肌成纤维细胞,构建过表达miR-154、干扰miR-154的细胞模型。3、q RT-PCR方法检测慢病毒转染5组细胞后miR-154表达情况;4、CCK8实验检测各组慢病毒转染后的细胞活力;划痕实验和Transwell实验观察各组慢病毒转染后细胞的迁移能力;流式细胞技术检测各组慢病毒转染后对细胞周期的影响;5、Western Blot、q RT-PCR检测5组细胞慢病毒转染后α-SMA、β-catenin、DKK2的蛋白、m RNA表达水平;研究结果:1、TGF-β1（5ng/ml/... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英缩略词表
第1章 前言
    1.1 肌成纤维细胞生成是肺纤维化发生的重要环节
    1.2 Wnt/β-catenin信号通路激活肌成纤维细胞
    1.3 miRNAs与Wnt/β-catenin的交互作用成为研究肺纤维化的新宠
    1.4 本研究主要内容
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞来源
        2.1.2 主要试剂及来源
        2.1.3 主要仪器和设备
        2.1.4 主要试剂及液体配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞的复苏、培养
        2.2.2 建立体外细胞模型
        2.2.3 L929细胞慢病毒转染及分组
        2.2.4 qRT-PCR检测L929细胞中miR-154表达
        2.2.5 Transwell实验检测转染后L929细胞迁移能力的变化
        2.2.6 划痕实验
        2.2.7 CCK8实验检测L929细胞活力
        2.2.8 流式细胞仪分析细胞周期分布
        2.2.9 Western blot印迹法检测蛋白表达
        2.2.10 qRT-PCR法检测mRNA表达
    2.3 统计学处理
第3章 结果
    3.1 Western Blot检测体外细胞模型结果
    3.2 L929细胞慢病毒转染及分组
    3.3 qRT-PCR检测L929细胞中miR-154表达
    3.4 Trannswell实验检测转染miR-154后L929细胞迁移能力的变化
    3.5 划痕实验
    3.6 CCK8实验转染miR-154后检测L929细胞增殖
    3.7 流式细胞仪分析细胞周期分布
    3.8 Western blot印迹法、qRT-PCR法检测基因表达
第4章 讨论
第5章 结论
第6章 不足与展望
致谢
参考文献
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]Bcl-2/Beclin-1复合体在自噬中的调节作用[J]. 叶挺,邵增务.  中国生物化学与分子生物学报. 2013(06)
[2]DAPT对肺成纤维细胞表型转化中Wnt信号通路的影响[J]. 龚文颖,曾林祥.  实用医学杂志. 2013(02)



本文编号：3569373