IL-13通过STAT6-TMEM16A-ERK1/2信号通路调节人支气管上皮细胞中MUC5AC表达

发布时间：2022-01-06 22:12

　　钙激活氯通道（Ca CC）广泛表达于各组织及细胞中,在多种病理生理过程中起着举足轻重的作用。研究表明,表达在气道上皮细胞中的Ca CC介导了多种炎症因子对黏液高分泌的调控过程。跨膜蛋白16A（TMEM16A）已被证实是Ca CC的分子基础,可能是参与该过程的关键因子。本课题中,我们用白介素-13（IL-13）分别刺激人支气管上皮细胞（HBE16）24-48小时后,结果显示细胞内TMEM16A的m RNA和蛋白的表达均上调。而用信号转导与转录激活因子6（STAT6）特异性抑制剂AS1517499处理细胞后却能下调TMEM16A的表达。该结果表明STAT6参与了IL-13对TMEM16A的调控机制过程。我们进一步研究发现,转染TMEM16A质粒的HBE16细胞中,TMEM16表达增多,同时引起细胞外信号调节激酶（ERK1/2）的活化增强。而TMEM16A基因敲除或用T16Ainh-A01（TMEM16A特异性抑制剂）处理HBE16后,细胞内TMEM16A表达被抑制,相应地p-ERK1/2表达减少,并伴随粘蛋白5AC（MUC5AC）m RNA及蛋白水平的下降。此外,我们在用TMEM16A质粒... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

调节IL-13诱导TMEM16A表达Fig.1RegulationofIL-13inducedTMEM16A.TheHBE16cellswereexposedto100ng/mlIL-13for24,36,and48hours.(A)qRT-PCR

表达为了解 STAT6 的激活是否参与 IL-13 诱导的 TMEM16A 表达过程，我siRNA 敲除 HBE16 细胞中的 STAT6 基因后加入 IL-13 刺激。用 western blo测 p-STAT6、TMEM16A 的蛋白水平，用 ELISA 检测 MUC5AC 的蛋白表达发现，与对照组细胞相比，特异性敲除 STAT6 基因后，明显减弱了 p-STAT性（图 2A），TMEM16A（图 2B，图 1C））和 MUC5AC（图 2D，图 2E）达也相应地减少。另外，我们用 AS1517499，一种 STAT6 特异性抑制剂，处理 H细胞后，细胞中 TMEM16A（图 2B，图 1C））及 MUC5AC（图 2D，图 2平也都明显降低。在相应的药物浓度条件下，细胞的数目未发生明显改变，说明抑制剂对细胞本身没有明显的毒性作用。总之，上述结果表明，STAT6 参与了 HBE16 细胞中 IL-13 诱导的 TME及 MUC5AC 的表达。

TMEM16A调控ERK活性Fig.3ERK1/2activityassociatedwithTMEM16A.TheHBE16cellsweretransfectedwithcontrolorTMEM16Aexpressionvector.(A)TheexpressionofTMEM16AproteinwasmeasuredbyWesternblotting.(B)Theexpressionof


本文编号：3573257