IL-37在香烟烟雾诱导小鼠肺部炎症中的作用及机制

发布时间：2022-01-16 10:47

　　目的白细胞介素（interleukin,IL）-37是IL-1家族第7个成员,共有5种亚型（a-e）,对IL-37b的研究最为集中,在多种炎症性疾病中发挥着重要的抗炎作用。香烟烟雾是慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）发病的主要因素,而COPD的发病进程与炎症反应密切相关。近期研究发现在COPD患者的血清中,IL-37的表达水平较健康对照组显著升高,表明IL-37可能参与COPD炎症反应的过程。因此本研究制备IL-37慢病毒,构建香烟烟雾诱导的小鼠肺部炎症模型,将IL-37慢病毒通过鼻滴注射到小鼠体内,使其在小鼠肺部过表达,探讨IL-37在香烟诱导小鼠肺部炎症中的作用和机制,为IL-37的临床运用进一步提供实验基础。方法1.把IL-37慢病毒表达载体与3个慢病毒辅助质粒去除内毒素后,共转染293T细胞。收集48 h、72 h、96 h产生的病毒上清,纯化浓缩后得到IL-37慢病毒,使用梯度稀释法测其滴度并检测病毒的感染活性。2.建立香烟烟雾诱导的小鼠肺部炎症模型,将收集到的慢病毒通过鼻腔进入到小鼠体内。C57BL/6雄... 

【文章来源】：宁波大学浙江省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
引言
1 IL-37 慢病毒表达载体的转化及慢病毒包装
    1.1 材料
        1.1.1 载体和菌株
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
        1.1.4 主要培养基配置
    1.2 方法
        1.2.1 引物的设计与合成
        1.2.2 制备感受态细胞
        1.2.3 转化
        1.2.4 菌落PCR鉴定
        1.2.5 质粒小量提取
        1.2.6 双酶切鉴定
        1.2.7 无内毒素质粒的提取
        1.2.8 细胞的复苏和培养
        1.2.9 IL-37 慢病毒包装
        1.2.10 慢病毒滴度测定
        1.2.11 慢病毒活性检测
    1.3 结果
        1.3.1 IL-37 慢病毒表达载体的转化鉴定
        1.3.2 慢病毒包装
        1.3.3 慢病毒滴度测定
        1.3.4 慢病毒表达检测
    1.4 小结
2 IL-37 在香烟烟雾诱导小鼠肺部炎症中的作用
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要试剂及溶液配置
        2.1.3 主要仪器
    2.2 方法
        2.2.1 动物模型的建立
        2.2.2 小鼠组织标本的收集
        2.2.3 BALF细胞计数
        2.2.4 RT-PCR检测肺组织中细胞因子的表达情况
        2.2.5 ELISA检测细胞因子的变化
        2.2.6 检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的变化
        2.2.7 HE染色
        2.2.8 PAS染色
        2.2.9 Western blot检测NF-κB p65的表达
        2.2.10 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 小鼠体重变化
        2.3.2 细胞计数
        2.3.3 RT-PCR检测肺组织中细胞因子的变化
        2.3.4 BALF和肺组织细胞因子浓度的检测
        2.3.5 检测肺组织和血清中MPO浓度变化情况
        2.3.6 病理切片分析
        2.3.7 Western blot检测NF-κB p65的表达
    2.4 小结
结论
参考文献
附录A 综述
    参考文献(References)
在学研究成果
致谢
Abstract



本文编号：3592508