乌鲁木齐地区维、汉哮喘患者外周血 IL-2、IL-4、IFN-γ 基因表达及甲基化水平差异性研究

发布时间：2017-05-12 15:09

  本文关键词：乌鲁木齐地区维、汉哮喘患者外周血 IL-2、IL-4、IFN-γ 基因表达及甲基化水平差异性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:检测新疆维、汉人群哮喘患者及健康人群外周血CD4+T淋巴细胞中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)mRNA的表达及血浆中IL-2、IL-4、IFN-γ的蛋白表达水平,并检测IL-4、IFN-γ的甲基化程度,比较基因表达与甲基化水平的相关性。方法:(1)研究对象为150例哮喘急性发作期的患者(哮喘组),其中包括维吾尔族30例,汉族120例。107例健康人群(对照组),其中包括维吾尔族35例,汉族72例。哮喘组在新疆医科大学第一附属医院和新疆维吾尔自治区人民医院确诊为哮喘急性发作期的患者。对照组选择同期在新疆医科大学第一附属医院健康体检者。(2)采用SYBR Green I实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IFN-γ、IL-2和IL-4mRNA基因的表达水平。(3)应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测IFN-γ、IL-2和IL-4的蛋白表达水平。(4)采用SNaPshot分型技术对哮喘组107个样本及对照组105例样本进行IL-4、IFN-γ基因中的5个紧邻CpG位点进行单碱基延伸的甲基化定量分析。结果:(1)哮喘组IL-2mRNA及蛋白表达水平均低于对照组,但差异无统计学意义(P0.05),其中mRNA及蛋白表达在维吾尔族哮喘患者与汉族哮喘患者均无明显差异(P0.05)。IL-4、IFN-γmRNA及蛋白表达水平在哮喘组均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05),其中IFN-γmRNA及蛋白表达水平在维吾尔族哮喘患者与汉族哮喘患者差异均有统计学意义(P0.05),IL-4mRNA表达在维吾尔族哮喘与汉族哮喘有差异(P0.05),IL-4蛋白表达在维吾尔族哮喘与汉族哮喘无差异(P0.05)。(2)IFN-γ1SF、IFN-γ2SR、IL-42SR、IL-44SF位点甲基化程度在哮喘组与对照组差异均无统计学意义(P0.05)。IL4-1SF位点甲基化程度在哮喘组与对照组差异有统计学意义(P0.05)。IFN-γ1SF、IFN-γ2SR、IL-41SF、IL-42SR、IL-44SR位点甲基化程度在维吾尔族哮喘及汉族哮喘之间均无明显差异(P0.05)。IL4-1SF位点甲基化程度在汉族哮喘组高于汉族对照组,差异有统计学意义(P0.05)。(3)哮喘组IFN-γ、IL-4mRNA表达水平与IFN-γ1SF、IFN-γ2SR、IL4-1SF、IL4-2SR、IL4-4SR甲基化程度均无相关性(P0.05)。结论:IL-4、IFN-γ在哮喘组与对照组mRNA表达及蛋白表达差异均有统计学意义。IL-4mRNA表达在维吾尔族哮喘与汉族哮喘差异有统计学意义,IL-4蛋白表达在维吾尔族哮喘与汉族哮喘无差异,IL-4可能是引起维吾尔族哮喘与汉族哮喘患病率不同的原因。IL-2mRNA及蛋白表达水平在哮喘组与对照组差异均无统计学意义,其中mRNA及蛋白表达在维吾尔族哮喘患者与汉族哮喘患者无明显差异。IFN-γmRNA表达及蛋白表达在维吾尔族哮喘及汉族哮喘差异均有统计学意义,IFN-γ可能是引起维吾尔族哮喘与汉族哮喘患病率不同的原因。IL4-1SF位点在哮喘组和对照组有差异,IL-41SF位点高甲基化可以作为研究哮喘的途径。IL4-1SF位点甲基化程度在汉族哮喘组与汉族对照组之间差异有统计学意义,在维吾尔族哮喘组与维吾尔族对照组之间无差异,提示汉族人群这一位点更容易发生高甲基化。哮喘患者IL-4、IFN-γ的启动子区的甲基化水平对各自基因mRNA水平的表达不起调控作用。IL-4、IFN-γ五个位点在维吾尔族哮喘与汉族哮喘甲基化程度均无差异,IL-4、IFN-γDNA甲基化可能不是引起维吾尔族哮喘与汉族哮喘患病率不同的原因。
【关键词】：哮喘 白细胞介素-2 白细胞介素-4 干扰素-γ 反转录聚合酶链反应 DNA甲基化 单碱基延伸法
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-14
• 内容与方法14-29
• 1.研究对象14-15
• 2.研究方法15-27
• 2.1.RT-PCR检测IL-2、IL-4、IFN-γ 基因表达15-20
• 2.2.ELISA检测IL-2、IL-4、IFN-γ 蛋白表达20-22
• 2.3.SNaPshot检测IL-4、IFN-γ 甲基化程度22-27
• 3.质量控制27
• 4.统计方法27-28
• 5.技术路线图28-29
• 结果29-37
• 讨论37-47
• 小结47-48
• 致谢48-49
• 参考文献49-55
• 综述55-64
• 参考文献60-64
• 攻读硕士学位期间发表的学位论文64-65
• 导师评阅表65

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