Rho GTPases及效应子IQGAP1在气道上皮细胞损伤修复中的作用研究
发布时间：2022-02-05 00:10
第一部分气道上皮细胞中机械划伤致IQGAP1磷酸化对损伤修复的影响实验背景:由于气道（气管和支气管）粘膜暴露于外界环境,易受到损伤。气道上皮受损后将立即启动修复过程,从而保持正常的肺功能。这个损伤修复过程需要气道上皮细胞伸展,迁移和增生最终覆盖受损区域。气道受损是气道疾病例如慢性支气管炎和COPD的重要的发病过程。因此气道上皮自身的修复能力是解决这些气道疾病的关键步骤。然而,参与气道上皮损伤修复的分子机制尚未完全明了。IQGAP1（IQ domain GTPase-activating protein）在许多细胞生命活动中是一个非常有意义的蛋白,但是尚未有人阐述其在气道上皮损伤修复中的作用。磷酸化作为翻译后的主要手段,参与调节蛋白质及细胞骨架的功能。有报导显示,IQGAP1丝氨酸残基能被高磷酸化,结果能促进神经元轴突外生性生长。PKC的一个新的亚型PKCε可能有助于IQGAP1的磷酸化。我们推测,在气道上皮损伤修复过程中IQGAP1磷酸化可能发挥重要作用。目的:使用目前广泛应用的刮伤气道上皮细胞的体外模型,初步探讨机械划伤后IQGAP1的磷酸化水平以及对损伤修复的影响。方法:建立机械划...
【文章来源】：华中科技大学湖北省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
pcDNA3-PKCε（HAtag）质粒图
图 2. IQGAP1 在气道上皮中的表达和定位左：小鼠（a，支气管）、大鼠（b，支气管）、猪（c，细支气管）和人（d，支气管）的鲜肺组织标本被固定和石蜡包埋。采用免疫组化 S-P 法检测了 IQGAP1 的表达。黑色箭头代IQGAP1 的表达。每次实验至少在三例标本中重复且每种条件下至少取 5 个视野以证实重复性放大倍数×200，DAB 显色。Scale bar，50 μm。右：机械划伤或 nocodazole（5 μg/mL）处理 30 m后，16HBE14o-细胞被固定且与相应抗体孵育，接着用 FITC-和 TRIFC-标记的二抗反应。对照中细胞不进行处理。图像从激光共聚焦显微镜获取。显示的图像是每种条件下至少 5 个视野中选出。Scale bar，10 μm。二、机械划伤后气道上皮的形态学特点相差显微镜下观察，培养的气道上皮细胞呈现上皮细胞典型的铺路石状形态，特点是立体的，稍微凸起的，细胞间紧密连接（图 3 a）。在机械性损伤后，气道皮细胞可成片状的单向迁移，且其迁移方向垂直于划痕方向。损伤 6 h 是细胞形态发生显著改变，形成具有特征性的极化形态学改变（图 3 b），损伤 12 h 更为显著（3 c）。损伤 24 h 后迁移的气道上皮细胞能掩盖划线部分（图 3 d）。
图 2. IQGAP1 在气道上皮中的表达和定位左：小鼠（a，支气管）、大鼠（b，支气管）、猪（c，细支气管）和人（d，支气管）的新鲜肺组织标本被固定和石蜡包埋。采用免疫组化 S-P 法检测了 IQGAP1 的表达。黑色箭头代表IQGAP1 的表达。每次实验至少在三例标本中重复且每种条件下至少取 5 个视野以证实重复性。放大倍数×200，DAB 显色。Scale bar，50 μm。右：机械划伤或 nocodazole（5 μg/mL）处理 30 min后，16HBE14o-细胞被固定且与相应抗体孵育，接着用 FITC-和 TRIFC-标记的二抗反应。对照组中细胞不进行处理。图像从激光共聚焦显微镜获取。显示的图像是每种条件下至少 5 个视野中所选出。Scale bar，10 μm。二、机械划伤后气道上皮的形态学特点相差显微镜下观察，培养的气道上皮细胞呈现上皮细胞典型的铺路石状形态，其特点是立体的，稍微凸起的，细胞间紧密连接（图 3 a）。在机械性损伤后，气道上皮细胞可成片状的单向迁移，且其迁移方向垂直于划痕方向。损伤 6 h 是细胞形态即发生显著改变，形成具有特征性的极化形态学改变（图 3 b），损伤 12 h 更为显著（图3 c）。损伤 24 h 后迁移的气道上皮细胞能掩盖划线部分（图 3 d）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]β-连环素及相关蛋白在脂多糖致急性肺损伤小鼠气道上皮的表达[J]. 洪渊智,李娜萍,吴人亮,刘明阁,马燕. 华中科技大学学报(医学版). 2007(04)
[2]细胞质连接蛋白-170在小鼠气道上皮损伤修复过程中的动态变化[J]. 马燕,李娜萍,吴人亮,刘明阁,洪渊智,朱敏,田丹. 华中科技大学学报(医学版). 2007(01)
[3]香烟烟雾提取物对气道上皮细胞增殖和FIP200表达的影响[J]. 许丽,张珍祥,徐永健. 第四军医大学学报. 2005(19)
[4]血管活性肠肽对支气管上皮细胞趋化迁移的影响及机制[J]. 管茶香,张长青,秦晓群,罗自强,周伏文,孙秀泓. 生理学报. 2002(02)
[5]香烟烟雾提取物对猪气道上皮细胞β-连环素及酪氨酸磷酸化的影响[J]. 陈芳,吴人亮,王曦,郝天玲. 中华医学杂志. 2001(07)
[6]上皮钙粘附素在吸烟小鼠呼吸道上皮损伤修复中表达的研究[J]. 许三林,吴人亮,陈春莲,郝春荣. 中华结核和呼吸杂志. 1999(07)
本文编号：3614200
【文章来源】：华中科技大学湖北省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
pcDNA3-PKCε（HAtag）质粒图
图 2. IQGAP1 在气道上皮中的表达和定位左：小鼠（a，支气管）、大鼠（b，支气管）、猪（c，细支气管）和人（d，支气管）的鲜肺组织标本被固定和石蜡包埋。采用免疫组化 S-P 法检测了 IQGAP1 的表达。黑色箭头代IQGAP1 的表达。每次实验至少在三例标本中重复且每种条件下至少取 5 个视野以证实重复性放大倍数×200，DAB 显色。Scale bar，50 μm。右：机械划伤或 nocodazole（5 μg/mL）处理 30 m后，16HBE14o-细胞被固定且与相应抗体孵育，接着用 FITC-和 TRIFC-标记的二抗反应。对照中细胞不进行处理。图像从激光共聚焦显微镜获取。显示的图像是每种条件下至少 5 个视野中选出。Scale bar，10 μm。二、机械划伤后气道上皮的形态学特点相差显微镜下观察，培养的气道上皮细胞呈现上皮细胞典型的铺路石状形态，特点是立体的，稍微凸起的，细胞间紧密连接（图 3 a）。在机械性损伤后，气道皮细胞可成片状的单向迁移，且其迁移方向垂直于划痕方向。损伤 6 h 是细胞形态发生显著改变，形成具有特征性的极化形态学改变（图 3 b），损伤 12 h 更为显著（3 c）。损伤 24 h 后迁移的气道上皮细胞能掩盖划线部分（图 3 d）。
图 2. IQGAP1 在气道上皮中的表达和定位左：小鼠（a，支气管）、大鼠（b，支气管）、猪（c，细支气管）和人（d，支气管）的新鲜肺组织标本被固定和石蜡包埋。采用免疫组化 S-P 法检测了 IQGAP1 的表达。黑色箭头代表IQGAP1 的表达。每次实验至少在三例标本中重复且每种条件下至少取 5 个视野以证实重复性。放大倍数×200，DAB 显色。Scale bar，50 μm。右：机械划伤或 nocodazole（5 μg/mL）处理 30 min后，16HBE14o-细胞被固定且与相应抗体孵育，接着用 FITC-和 TRIFC-标记的二抗反应。对照组中细胞不进行处理。图像从激光共聚焦显微镜获取。显示的图像是每种条件下至少 5 个视野中所选出。Scale bar，10 μm。二、机械划伤后气道上皮的形态学特点相差显微镜下观察，培养的气道上皮细胞呈现上皮细胞典型的铺路石状形态，其特点是立体的，稍微凸起的，细胞间紧密连接（图 3 a）。在机械性损伤后，气道上皮细胞可成片状的单向迁移，且其迁移方向垂直于划痕方向。损伤 6 h 是细胞形态即发生显著改变，形成具有特征性的极化形态学改变（图 3 b），损伤 12 h 更为显著（图3 c）。损伤 24 h 后迁移的气道上皮细胞能掩盖划线部分（图 3 d）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]β-连环素及相关蛋白在脂多糖致急性肺损伤小鼠气道上皮的表达[J]. 洪渊智,李娜萍,吴人亮,刘明阁,马燕. 华中科技大学学报(医学版). 2007(04)
[2]细胞质连接蛋白-170在小鼠气道上皮损伤修复过程中的动态变化[J]. 马燕,李娜萍,吴人亮,刘明阁,洪渊智,朱敏,田丹. 华中科技大学学报(医学版). 2007(01)
[3]香烟烟雾提取物对气道上皮细胞增殖和FIP200表达的影响[J]. 许丽,张珍祥,徐永健. 第四军医大学学报. 2005(19)
[4]血管活性肠肽对支气管上皮细胞趋化迁移的影响及机制[J]. 管茶香,张长青,秦晓群,罗自强,周伏文,孙秀泓. 生理学报. 2002(02)
[5]香烟烟雾提取物对猪气道上皮细胞β-连环素及酪氨酸磷酸化的影响[J]. 陈芳,吴人亮,王曦,郝天玲. 中华医学杂志. 2001(07)
[6]上皮钙粘附素在吸烟小鼠呼吸道上皮损伤修复中表达的研究[J]. 许三林,吴人亮,陈春莲,郝春荣. 中华结核和呼吸杂志. 1999(07)
本文编号：3614200
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